Patrones de sensibilidad de Staphylococcus pseudintermedius aislados de infecciones cutáneas en el perro

 

Introducción

Staphylococcus sp es un género de microorganismos constituido por cerca de 40 especies diferentes, de morfología cocal de un diámetro aproximado de 1µm, que se aíslan a partir de mucosas y piel en mamíferos. A pesar de que forman parte de la flora normal de la piel, bajo determinadas condiciones pueden comportarse como patógenos. Las principales especies patógenas en el hombre y en los animales de compañía, S. aureus, S. pseudintermedius y S. hyicus, son capaces de sintetizar el enzima coagulasa (especies coagulasa positivas). Las especies coagulasa negativas, S. epidermidis, S. saprophyticus, se comportan como comensales, llegando a causar infecciones de forma muy ocasional en animales de compañía. 

En dermatología veterinaria, Staphylococcus pseudintermedius es el microorganismo más frecuente, causante de piodermas. El tratamiento de estas infecciones cutáneas, conlleva un uso creciente de antibióticos, que está provocando la aparición de resistencias en los microorganismos implicados. En concreto, la aparición de cepas de Staphylococcus pseudintermedius resistentes a la meticilina y, por lo tanto, a todos los antibióticos beta-lactámicos, supone un serio problema, no sólo para los animales sino también para el hombre debido al potencial riesgo de zoonosis.

En Univet hemos querido cuantificar la prevalencia de éstas cepas resistentes, observando además, cuales son los antibióticos con mayor actividad in vitro frente a ellas.

Objetivo

El objetivo del presente trabajo fue estudiar los patrones de sensibilidad de Staphylococcus pseudintermedius, aislados en el laboratorio de microbiología de Univet, a partir de infecciones cutáneas del perro. Para ello, se testaron  diferentes grupos de antibióticos, así como la oxacilina, como principal antibiótico marcador de la resistencia a la familia de los beta-lactámicos. 

Material y métodos 

Cultivo y aislamiento de Staphylococcus pseudintermedius

El estudio retrospectivo se realizó a partir de 268 aislamientos de Staphylococcus pseudintermedius cultivados en Univet durante el periodo comprendido entre enero de 2009 y abril de 2010. Los aislamientos se obtuvieron de perros que presentaban infecciones de piel (piodermas superficiales y profundas), en muchos casos cronificadas.  

Para la recogida de las muestras se utilizaron hisopos con medio de cultivo Stuart- Amies (OXOID), aplicados sobre la superficie cutánea (a partir de pústulas o collaretes epidérmicos). En los casos de infecciones cutáneas profundas, las muestras se recogieron mediante biopsia y en condiciones de esterilidad para su posterior cultivo.

El envío de las muestras desde los centros veterinarios hasta el laboratorio de Microbiología de Univet se realizó en menos de 24h y a temperatura ambiente. 

Las muestras fueron procesadas para el aislamiento e identificación de las cepas de Staphylococcus pseudintermedius. Para ello, se sembraron en medio de cultivo rico en nutrientes como es el Agar sangre (OXOID). (Foto 1).

Foto nº 1. Aislamiento en medio de cultivo rico, agar sangre, de una cepa de Staphylococcus sp.

Las colonias compatibles con Staphylococcus sp, fueron identificadas como Staphylococcus intermedius utilizando galerías comerciales de identificación específicas. (ID 32 Staph. Biomerieux) (Foto 2). 

Foto nº 2. Identificación de una cepa de Staphylococcus pseudintermedius. mediante la galería comercial ID 32 Staph (OXOID).

En base a ello y según las recomendaciones de diferentes autores 1, las cepas aisladas fueron re-clasificadas  como Staphylococcus pseudintermedius.

Tabla 1. Antibióticos incluidos en el antibiograma, para el estudio de la sensibilidad de las cepas de Staphylococcus pseudintermedius aisladas a partir de muestras cutáneas.
AMINOGLUCÓSIDOS
Amikacina
BETA- LACTÁMICOS
Amoxicilina-clavulánico
Cefadroxilo
Cefalexina
Cefovecina
Oxacilina
QUINOLONAS
Ciprofloxacina
Enrofloxacina
Marbofloxacina
MACROLIDOS
Clindamicina
Claritromicina
TETRACICLINAS Doxiciclina
SULFONAMIDAS
Trimetoprim-Sulfametoxazol
OTROS
Acido fusídico
Rifampicina

Estudio de la sensibilidad de Staphylococcus pseudintermedius.

Una vez realizadas las identificaciones, se llevaron a cabo las pruebas de sensibilidad de las diferentes cepas frente a 15 antibióticos. Para ello, se utilizó el método de difusión en Agar Mueller Hinton (OXOID) o semi-cuantitativo de Kirby-Bauer siguiendo la normativa marcada por el National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS) a tal efecto 2.  (Foto 3).

 

Foto nº 3.Test de sensibilidad frente a diferentes antibióticos en Agar Mueller Hinton (OXOID) para una cepa de Staphylococcus pseudintermedius.

Tal y como puede observarse en la tabla 1, todos los aislamientos se testaron frente a una batería de 15 antibióticos diferentes, entre los que se incluyeron representantes de antibióticos quinolónicos, beta-lactámicos,  sulfonamidas, aminoglucósidos y macrólidos. Además, se probaron otros antibióticos como la rifampicina y el ácido fusídico.  Finalmente,  se incluyó un antibiótico marcador de resistencia a los beta-lactámicos, la oxacilina, para la detección de los Staphylococcus meticilina-resistentes. (Foto 4).

Foto nº 4. Resultado de un test de sensibilidad a la oxacilina para una cepa de Staphylococcus pseudintermedius meticilina resistente previamente aislada.

Para cada aislamiento de Staphylococcus pseudintermedius, se midió el diámetro del halo de inhibición, en milímetros, de cada uno de los antibióticos testados, y se contrastó con los valores de referencia presentes en las tablas estandarizadas del NCCLS, a fin de determinar la sensibilidad o resistencia del microorganismo.

Tabla 2.Resultados de sensibilidad para cada uno de los antibióticos utilizados en el estudio. Se muestran los porcentajes de aislamientos resistentes para cada uno de de los antibióticos, en relación al número total de cepas testadas (ntotal= 268).
AMINOGLUCÓSIDOS  
  Amikacina 1.1 % (n= 3)
BETA –LACTÁMICOS  
  Amoxicilina-clavulánico 38.4%     (n= 103)
  Cefadroxilo 44.7% (n= 120)
  Cefalexina 50% (n= 134)
  Cefovecina 39.1% (n= 105)
  Oxacilina 35.8% (n= 96)
QUINOLONAS  
  Ciprofloxacina 38% (n= 102)
  Enrofloxacina 40.3% (n= 108)
  Marbofloxacina 40.3% (n= 108)
MACROLIDOS
  Clindamicina 41.8% (n= 112)
  Claritromicina 39.9% (n=  107)
TETRACICLINAS
  Doxiciclina 38% (n=  102)
SULFONAMIDAS
  Trimetoprim-Sulfametoxazol 56.3% (n= 151)
OTROS
  Acido fusídico 8.2% (n= 22)
  Rifampicina 4.8% (n= 13)

 

Resultados 

De las 268 cepas de S. pseudintermedius aisladas en Univet durante el período de estudio, el 70%  fueron resistentes a alguno de los grupos de antibióticos testados: quinolonas, beta-lactámicos,  sulfonamidas, aminoglucósidos y macrólidos.  Así, sólo un 30% de cepas fueron sensibles a todos los antibióticos (datos no mostrados).

En la tabla 2, se resumen los resultados obtenidos para cada uno de los antibióticos testados. Se muestran los porcentajes de cepas resistentes a cada uno de ellos, respecto al total de aislamientos.

Entre los antibióticos frente a los que los microorganismos mostraron una mayor resistencia, destacan la cefalexina 50% y el cefadroxilo 44.7%, cefalosporinas de primera generación,  utilizadas como antibióticos de primera elección. 

Los datos de este estudio indican que del total de 268 aislamientos de Staphylococcus pseudintermedius estudiados, 96 de ellos (35.8% del total) fueron aislamientos meticilina-resistentes (resistentes a la oxacilina y por extensión a los diferentes beta-lactámicos testados),

Además,  56 de éstas cepas meticilina resistentes (20.8% del total de cepas) resultaron ser multiresistentes, es decir, mostraron resistencia a más de 4  familias de antibióticos diferentes (quinolonas, macrólidos, amino-glucósidos, o sulfonamidas).  

Finalmente, los antibióticos con mayor actividad in vitro frente a las cepas multi-resistentes fueron la amikacina, la rifampicina y el ácido fusídico, con porcentajes de sensibilidad cercanos al 100% de las cepas (98,9%, 95,2% y 91,8% respectivamente). 

Discusión

Mediante este estudio, se ha podido constatar como los Staphylococcus pseudintermedius aislados a partir de piodermas, muestran de forma frecuente resistencias frente a antibióticos beta-lactámicos, muy utilizados en la clínica.  Este hecho se hace aun más evidente con la inclusión en los antibiogramas de la oxacilina como marcador de resistencia a los beta-lactámicos, 

En general, la prevalencia de Staphylococcus sp meticilina-resistentes es muy variable en función del área geográfica en la que se realice el estudio y la terapia antibiótica utilizada. Los datos de prevalencia obtenidos en Univet, muestran que en España un 35.8 % de Staphylococcus pseudintermedius son meticilina resistentes. Estos datos muestran un porcentaje significativamente más elevado en comparación con los obtenidos por otros autores 3  en estudios de 2009, basados en aislamientos recogidos a partir de perros sanos no tratados previamente. Se debe al hecho de que la mayor parte de muestras recibidas en Univet e incluidas en el estudio, corresponde a casos de infecciones cutáneas crónicas o recurrentes. Por tanto, el incremento en el porcentaje de Staphylococcus pseudintermedius meticilina resistentes, podría estar causado por una terapia antibiótica no basada en estudios de sensibilidad previos. 

Dado que los animales de compañía, se comportan como un reservorio de cepas de Staphylococcus sp resistentes a la meticilina y multiresistentes, con el consiguiente riesgo de zoonosis para el hombre, siempre que la pioderma no responda a una terapia estándar, se debería realizar un cultivo y antibiograma. El resultado permitirá saber si estamos frente a un estafilococo meticilina resistente, y escoger los antibióticos más adecuados para el tratamiento.

Bibliografía

1. Devriese LA, Hermans K, Baele M, Haesebrouck F. 2009. Staphylococcus pseudintermedius versus Staphylococcus intermedius. Vet Microbiol. Jan 1; 133(1-2):206-7. Epub 2008 Jun 8.

2. Performance Standards for antimicrobial disk and dilution susceptibility tests for Bacteria Isolated From Animals; Approved Standard. Third Edition.  M31-A3. Vol 28. Nº8.

3. Ruscher C, Lübke-Becker A, Wleklinski CG, Soba A, Wieler LH, Walther B. 2009. Prevalence of Methicillin-resistant Staphylococcus pseudintermedius isolated from clinical samples of companion animals and equidaes. Vet Microbiol. Apr 14;136(1-2):197-201. Epub 2008 Oct 31.

 

Autores

Escribano C. , Ordeix L., Pol G., Puigdemont A., Brazis P.

Publicado en Centro Veterinario