BinXi Wu^1*Amandine Lejeune²Verena K. Affolter¹Giulia Iamone³Fulvio Riondato³Amir Kol¹

• ¹Departamento de Patología, Microbiología e Inmunología, Facultad de Medicina Veterinaria Davis de la Universidad de California, Davis, CA, Estados Unidos
• ^{número arábigo}Departamento de Ciencias Quirúrgicas y Radiológicas, Facultad de Medicina Veterinaria Davis de la Universidad de California, Davis, CA, Estados Unidos
• ³Departamento de Ciencias Veterinarias, Facultad de Agricultura y Medicina Veterinaria, Universidad de Turín, Turín, Italia

El tumor de mastocitos (MCT) es un cáncer de piel común en perros que tiene una amplia gama de comportamientos clínicos. El propósito de este estudio fue desarrollar un nuevo panel de citometría de flujo (FC) multicolor que permita la cuantificación de marcadores pronósticos candidatos (Ki-67 y pKIT) en muestras de aspirado con aguja fina (PAAF) antes de la extirpación quirúrgica de los tumores. Se utilizaron FNA de MCTs caninos y la línea celular NI-1 para desarrollar un panel FC que incluye un colorante de viabilidad (FVS620, BD Biosciences; 7-AAD, Invitrogen) y los siguientes anticuerpos primarios conjugados: CD117-PE (ACK45, BD Biosciences), pKIT-A647 (policlonal bs-3242R, BIOSS) y Ki-67-FITC (20Raj1, eBioscience; MIB-1, DAKO). Se recolectaron un total de nueve muestras de FNA de MCT caninos, siete de las cuales produjeron suficientes células para el análisis de CF. El clon de anticuerpos Ki-67 20Raj1 produjo una señal positiva cuando se aplicó a los leucocitos sanguíneos, pero no proporcionó un marcaje sólido de los mastocitos neoplásicos. El clon de anticuerpos Ki-67 MIB-1 proporcionó una calidad de tinción superior tanto en las células NI-1 como en las células MCT primarias. La señal de CD117-PE fue adecuada después de la fijación y permeabilización y en la combinación de 7-AAD. pKIT producía tinciones inespecíficas y no era adecuado para este panel FC multicolor. En conclusión, las muestras de FNA de MCT caninos a menudo pueden producir un número adecuado de células para el análisis de FC, y se desarrolló un panel de FC multicolor que puede detectar Ki-67 en mastocitos caninos. Esto permitiría realizar más estudios sobre el posible uso de este panel con fines pronósticos de MCT cutáneo y subcutáneo canino.