Ze Cheng¹Zenglin Wang¹Lizhu Quan¹Zhendong Zhang¹Wenqiang Wang¹Wei Wen¹Zhenbang hu¹Xiangdong Li^1,2*

• ¹Centro de Co-innovación de Jiangsu para la Prevención y el Control de Enfermedades Infecciosas Animales Importantes y Zoonosis, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de Yangzhou, Yangzhou, China
• ^{número arábigo}Laboratorio Internacional Conjunto de Investigación de Agricultura e Inocuidad de Productos Agrícolas, Ministerio de Educación de China, Universidad de Yangzhou, Yangzhou (China)

La enfermedad por circovirus porcino representa una dolencia prevalente que se manifiesta principalmente por una serie de síntomas clínicos, que incluyen trastornos reproductivos en cerdas y altas tasas de mortalidad en lechones. Ha traído enormes pérdidas económicas a la industria porcina mundial. Además, los síntomas desencadenados por los diferentes genotipos de circovirus porcino son similares y difíciles de distinguir. Por lo tanto, es esencial establecer un ensayo de diagnóstico diferencial de PCR triplex en tiempo real rápido, preciso, eficiente en el tiempo y de alto rendimiento para detectar PCV2, PCV3 y PCV4. En este estudio, se diseñaron cebadores y sondas específicos basados en las secuencias conservadas de las secuencias ORF1 de PCV2, PCV3 y PCV4. Se estableció y optimizó el ensayo triplex de PCR en tiempo real, que mostró una especificidad, sensibilidad, repetibilidad y reproducibilidad satisfactorias. El límite de detección (LOD) se determinó a 4,8×10¹ copias/μL. Los coeficientes de correlación^R2 superaron 0,999 y no se encontró infección cruzada con otros patógenos virales porcinos. Además, tanto la intra-repetibilidad como la inter-repetibilidad fueron inferiores al 2%, lo que atestigua aún más la fiabilidad y estabilidad de este ensayo. La completa coherencia de los resultados de detección con los de los kits comerciales de PCR en tiempo real de plex único indica que el ensayo establecido tiene una precisión satisfactoria. A continuación, se aplicó el ensayo establecido para detectar 370 muestras clínicas que se recogieron entre 2023 y 2024 en la provincia norteña de Anhui, en China. Los resultados mostraron que la tasa positiva de PCV2 fue del 81,35% (301/370), la tasa positiva de PCV3 fue del 72,43% (268/370) y la tasa positiva de coinfección de PCV2 y PCV3 fue del 38,37% (142/370). Sin embargo, no se detectó PCV4. Por lo tanto, el ensayo de PCR triplex en tiempo real establecido en este estudio proporciona una herramienta valiosa para la detección del circovirus porcino, lo que facilita la investigación epidemiológica del circovirus porcino en China.