Kaichuang Shi^1,2,3*†Xin Hu^2†Yanwen Yin³Yuwen Shi²Yi Pan¹Feng Largo³Feng Esquivando³Zongqiang Li^2*

• ¹Escuela de Ciencias Médicas Básicas, Universidad Médica de Youjiang para las Nacionalidades, Baise, China
• ^{número arábigo}Facultad de Ciencia y Tecnología Animal, Universidad de Guangxi, Nanning, China
• ³Centro de Guangxi para el Control y la Prevención de Enfermedades Animales, Nanning, China

El virus de la encefalomielitis hemaglutinadora porcina (PHEV), el virus de la pseudorrabia porcina (PRV) y el virus de la peste porcina clásica (PPC) son actualmente prevalentes en todo el mundo y causan síntomas neurológicos similares en cerdos infectados. Es muy importante establecer un método de detección que pueda detectar y diferenciar estos tres virus de forma rápida y precisa. Con el objetivo de utilizar el gen PHEV N, el gen PRV gB y la región no traducida CSFV 5′ (5′UTR), se diseñaron tres pares de cebadores y sondas específicos, y se desarrolló una PCR de transcripción inversa digital de triple cristal (cdRT-PCR) para detectar PHEV, PRV y CSFV. Los resultados indicaron que este ensayo tenía una alta sensibilidad, y la limitación de detección (LOD) para PHEV, PRV y CSFV fue de 4,812, 4,047 y 5,243 copias/reacción, respectivamente, que fue aproximadamente 50 veces mayor que la de la RT-PCR cuantitativa en tiempo real múltiple (RT-qPCR). Este ensayo mostró una buena especificidad, sin reacción cruzada con otros patógenos porcinos importantes, es decir, FMDV, PRRSV, PEDV, SIV, TGEV, PoRV y PCV2. Este ensayo tuvo una alta repetibilidad, con coeficientes de variación (CV) intraensayo de 0,73-1,87 % y CV entre ensayos de 0,57-2,95 %. El ensayo desarrollado se utilizó para analizar 1.367 muestras de tejido clínico de la provincia de Guangxi en China, y las tasas positivas de PHEV, PRV y CSFV fueron del 3,44% (47/1.367), 1,24% (17/1.367) y 1,90% (26/1.367), respectivamente, con una tasa de coincidencia del 98,98% y un valor Kappa de 0,94 para la RT-qPCR multiplex de referencia. El triplex cdRT-PCR establecido fue un ensayo altamente rápido, sensible y preciso para detectar y diferenciar PHEV, PRV y CSFV.