Introducción

El costo de los ingredientes de los piensos para aves de corral representa alrededor del 60-70% del costo total de producción y, por lo tanto, la formulación de piensos es un enfoque crítico en la industria avícola. La utilización de los piensos puede satisfacerse con la inclusión de enzimas, antimicrobianos, probióticos o productos prebióticos o naturales (1-9).

El efecto inmunomodulador de la suplementación de los piensos para aves de corral con multienzimas ha sido bien documentado en la literatura. Hosseindoust et al. (10) concluyeron que la β-mananasa tiene el potencial de mejorar la salud intestinal de los pollos de engorde alimentados con una dieta a base de maíz y harina de soja (SBM). En el mismo estudio, también se mejoró el rendimiento del crecimiento y la retención total de nutrientes en el tracto. Liu et al. (11) investigaron el efecto de multienzimas que contienen fitasa, proteasa y xilanasa a 1.000, 2.000 y 2.000 U/kg de alimento para pollos de engorde, respectivamente. Los autores demostraron que las multienzimas mejoraron significativamente la ingesta de alimento, el aumento de peso corporal, el receptor polimérico de Ig (pIgR), la secretaria de IgA (sIgA) y los recuentos ileales de lactobacilos y bifidobacterias, y redujeron significativamente las lesiones en el intestino, los anticuerpos séricos contra la toxina a, la expresión de mucina 2 y el recuento ileal de Clostridium perfringens. Sin embargo, la fuerza del efecto multienzimático depende del contenido de proteínas en la dieta. Los autores señalaron que un alto contenido de proteínas no convencionales en la dieta puede conducir a una mayor aparición de enteritis necrótica subclínica, mientras que la suplementación multienzimática puede reducir este efecto en pollos de engorde al mejorar la inmunidad intestinal (11).

La suplementación de las raciones de alimento para aves de corral con enzimas puede mejorar la utilización del alimento y eliminar el efecto negativo de los polisacáridos sin almidón (NSP) en el rendimiento de los pollos de engorde (12-14). Se afirma que la suplementación multienzimática, como la amilasa, la xilanasa y la proteasa, estimula la desintegración del almidón, las paredes celulares y las proteínas endógenas y, por lo tanto, mejora la utilización de la energía en las dietas de maíz y sorgo (15). Attia et al. (16) revelaron que la suplementación de la dieta de las aves de corral con multienzimas mejoró el costo económico de las dietas. Sin embargo, la composición y el tipo de mezcla enzimática determinan el efecto de la suplementación multienzimática en el rendimiento de la producción avícola (17-19).

Se afirma que el uso de complejos enzimáticos que contienen carbohidrasas y proteasas mejora la utilización de energía, proteínas, P y Ca por pollos de engorde, gallinas ponedoras, patos y codornices japonesas (16, 17, 20, 21). Sin embargo, todavía hay resultados contradictorios sobre el efecto beneficioso de las multienzimas en el rendimiento de las aves, y esto podría atribuirse a la composición de la dieta, la edad y el tipo de pollitos, lo que sugiere la necesidad de más investigación (17, 22).

El uso de la dieta de baja densidad (LDD) con o sin suplementación enzimática en relación con las respuestas fisiológicas e inmunológicas y la bioquímica del estado antioxidante de los pollos de engorde es un nuevo concepto en la nutrición de los pollos de engorde. La mayoría de las investigaciones previas se centraron en el rendimiento productivo y las características de la canal como criterios económicos (18, 22, 23). En la literatura, se encontró que la suplementación con enzimas, en particular las dietas bajas en energía o los alimentos que contienen alto contenido de fibra y/o factores antinutricionales, mejoran el uso de energía para el crecimiento (12-18, 21, 23-26). Por otro lado, la inmunidad y el estado antioxidante y el desarrollo de los órganos internos pueden necesitar más nutrientes que los necesarios para el crecimiento y la calidad de la canal y pueden reflejar perfectamente el estado nutricional de los animales (24, 25). Por lo tanto, este estudio se centra en la intervención nutricional entre la LDD y la suplementación enzimática desde el punto de vista de la bioquímica, las respuestas fisiológicas e inmunológicas, el estado antioxidante y la histología de los órganos.

Materiales y métodos

Pollitos, dieta y diseño experimental

El comité departamental de Producción Animal y Avícola acepta todos los procedimientos realizados en el presente estudio. Estos procedimientos sugieren una tensión mínima para los animales a fin de garantizar los derechos y el bienestar mediante la eliminación del daño o el sufrimiento de los animales de acuerdo con los decretos oficiales del Ministerio de Agricultura de Egipto sobre el bienestar animal [Decreto Nº 27 (1967) que impone el trato humanitario de los animales en general].

Se compraron un total de 216 pollos de engorde Arbor Acres de 1 día de edad a Cairo Poultry Company, anillados con alas y distribuidos de manera aleatoria, independientemente de su sexo, con igual peso corporal inicial (45,8 ± 1,42) en 36 jaulas de 6 aves por jaula. Cada tratamiento consta de seis repeticiones, con seis pollitos por repetición.

El experimento se diseñó con dos dietas [dieta estándar (DE) vs. LDD] y tres niveles multienzimáticos (sin suplementar, 0,1 y 0,2%) en un diseño factorial (2 × 3) durante 1-38 días de edad. Galzym-M son productos de Tex Biosciences, Reino Unido. Galzym es una multienzima que contiene celulasa 100.000.000 U/kg, 4-β-xilanasa 1.500.000 U/kg, lipasa 6.500 U/g, α-amilasa 250.000 U/kg, proteasa 40.000 U/kg, pectinasa 30.000 U/kg y benzoato de sodio (conservante) 50 mg/kg. La composición química de las dietas basales experimentales administradas durante las etapas experimentales se muestra en la Tabla 1 (27). La dieta de inicio se alimentó desde la eclosión hasta los 7 días de edad (1 semana); Se administró una dieta de crecimiento de 8 a 21 días de edad (2-3 semanas); y se alimentó con una dieta de engorde de 22 a 38 días de edad.^®

TABLA 1. Ingredientes y composición química de las dietas basales experimentales alimentadas durante las etapas experimentales.

Alojamiento de animales

Los pollitos se distribuyeron en jaulas en batería en una habitación semiabierta. Las raciones de alimento se suministraban ad libitum y se accedía libremente al agua. Se siguió un programa de luz comercial hasta el 7º día de luz de 23 h, seguido de luz de 20 h desde el 8º día a través de la fase de cría hasta el día 38 de edad. Las temperaturas mínimas y máximas exteriores y la humedad relativa durante la fase de cría se promediaron en 22.9 y 28.3°C y 60.1 y 62.2%, respectivamente. La temperatura interior fue de 33,2, 28,3 y 26,7 °C durante los días 1-7, 8-18 y 15-20 de edad, respectivamente. El programa de vacunación consiste en el clon 30 el día 8, la inyección doble de la gripe H5 N2 muerta y el virus de la enfermedad de Newcastle (VEN) debajo de la piel del cuello el día 10, y el clon 30 y Gumboro el día 21.

Recogida de datos

El BWG (g/ave) se calculó con base en el peso de los pollos de engorde (g) a los 1, 21 y 38 días de edad. Se calculó la tasa de conversión alimenticia (FCR) (g de alimento/g de ganancia) en función de la ingesta de alimento (g/ave) y se calculó la tasa de supervivencia (SR, 100 – tasa de mortalidad) durante 1-21, 22-38 y 1-38 días de edad. El Índice Europeo de Eficiencia de la Producción (EPEI) se calculó utilizando la ecuación de la Guía de Manejo de Pollos de Engorde Hubbard (28) de la siguiente manera:

donde PP = Período de producción (días).

Recolección de muestras de sangre

Las muestras de sangre (n = 6) se extrajeron aleatoriamente de cada grupo experimental el día 8 después de la vacunación (29 días de edad), así como el día 0 (justo antes de la vacunación). Las muestras de sangre se extrajeron de la vena branquial mediante el uso de un tubo vacutainer utilizando tubos heparinizados y no heparinizados. El suero y el plasma se separaron por centrifugación a 1.500 × g durante 15 min. Las muestras de sangre utilizadas para los análisis se recogieron antes del inicio de todas las vacunaciones (día 0) y después del final de la última vacunación (día 29 de edad).

Rasgos hematológicos

El volumen de células empaquetadas (% de PCV) se determinó centrifugando las muestras de sangre durante 20 min a 2.000 × g utilizando tubos de hematocrito Wintrobe (Jiangdu Sunflower Glass Instrument Factory, Jiangdu, China). Se utilizó el método de la cianometahemoglobina para determinar la concentración de hemoglobina (Hgb) (29). El recuento de glóbulos rojos se determinó mediante el método de (30) y los índices de glóbulos rojos se calcularon según lo descrito por Jain (31) de acuerdo con las siguientes ecuaciones:

Volumen corpuscular medio (VCM) (μm³) = PCV × 10/RBC’s

Hemoglobina corpuscular media (MCH) (pg) = Hgb × 10/RBC’s

Concentración media de hemoglobina corpuscular (MCHC) (g/dl) = Hgb × 100/PCV.

Índices inmunológicos

La actividad fagocítica y el índice se determinaron de acuerdo con Kawahara et al. (32). Actividad fagocítica (PA) = porcentaje de células fagocíticas que contienen células de levadura. Índice fagocítico (IP) = número de células de levadura fagocitadas/número de células fagocíticas. Esta prueba indica la actividad de los glóbulos blancos que fagocitan las partículas extrañas dañinas, las bacterias y las células muertas o moribundas. Es un índice inmunológico importante, que indica fuertemente y refleja el estado inmunológico. Estos fagocitos son principalmente monocitos y macrófagos, granulocitos y células dendríticas. El índice fagocítico indica la fuerza de la célula fagocítica, representada por el número de bacterias ingeridas. La actividad fagocítica se considera la primera línea de defensa contra antígenos y agentes patógenos (33, 34).

La producción total de anticuerpos específicos para la vacuna contra el VEN se determinó en suero utilizando kits comerciales de ELISA (35). La respuesta de anticuerpos se determinó mediante la prueba de inhibición de la hemaglutinación (IH) según King y Seal (36). El ensayo está diseñado para medir los anticuerpos de la EII unidos a placas recubiertas de antígeno de influenza (37). Se utilizó el método de Takatsy y Hamar (38) para determinar el IH frente al VEN y la influenza aviar. La prueba de transformación de linfocitos se determinó siguiendo el método de Balhaa et al. (39). Esta prueba mide la proliferación de células T a un fármaco in vitro, a partir de la cual se puede simular una reacción previa in vivo contra la sensibilización a un fármaco. La prueba de transformación de linfocitos se ha implementado ampliamente para el diagnóstico médico de inmunodeficiencia, enfermedades patógenas y alergia tipo IV (40, 41). Se utilizó el método de Rainger y Rowley (42) para determinar la actividad bactericida sérica de la cepa Aeromonas hydrophila, y los resultados se expresaron como índice de supervivencia. Esta prueba se utiliza para medir la actividad bactericida del suero durante el tratamiento antimicrobiano contra bacterias aisladas del mismo paciente. Esta prueba se ha utilizado ampliamente en pacientes con endocarditis infecciosa, osteomielitis, bacteriemia u otras infecciones bacterianas graves (43, 44). Se utilizó el método turbidimétrico de Engstad et al. (45) para medir la actividad de la lisozima sérica. Esta prueba representa la actividad de monocitos/macrófagos y se ha utilizado ampliamente para medir la actividad de diversas enfermedades (46, 47). La reducción de la absorbencia de 0,001/min refina el resultado de esta prueba, que se expresa como una unidad de actividad de lisozima. Actividad de la lisozima = (A0 – A)/A.

Rasgos bioquímicos

Se utilizaron kits comerciales producidos por Diamond Diagnostics (23 EL-Montazah St. Heliopolis, El Cairo, Egipto, http://www.diamonddiagnostics.com) para medir los rasgos bioquímicos de la sangre. Se utilizaron los métodos de Armstrong y Carr (48), Doumas et al. (49) y Doumas y Peters (50) para medir las concentraciones séricas totales de proteínas y albúmina. Se utilizó el método de Cole (51) para estimar la concentración de globulina a través de la resta de la concentración de albúmina de la proteína total sérica. Se utilizó el método de Bossuyt et al. (52) para medir los diferentes tipos de globulina (α-β- y γ-globulina).

Se utilizó el método de Reitman y Frankel (53) para determinar las actividades de la alanina aminotransferasa (ALT, U/L) y la aspartato aminotransferasa (AST, U/L). Las actividades de las enzimas fosfatasa alcalina (ALKP) se ensayaron en muestras por el método de McComb y Bowers (54). Se determinó la capacidad antioxidante total sérica (TAC) y el malondialdehído (MDA) según Erel (55).

Estudio Histopatológico

El intestino (es decir, el íleon), la bolsa de Fabricius, el timo y los especímenes de bazo se recolectaron a los 38 días de edad de seis aves de cada tratamiento dietético, n = 6, y se fijaron directamente en solución salina de formalina tamponada al 10% (BFS) durante al menos 24 h. Se utilizó la técnica convencional de inclusión en parafina para procesar las muestras fijas. Esta técnica consiste en deshidratar a través de grados ascendentes de etanol, aclarar en cloroformo e incrustar en cera de parafina a 60 °C. Los bloques de parafina resultantes se cortaron en rodajas de 5 μm de espesor y se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) siguiendo el método descrito por Culling (56).

Para la medición cuantitativa morfométrica del eje longitudinal del folículo bursal grande, se examinaron cinco secciones por réplica por tratamiento utilizando el analizador de imágenes Optika montado en un microscopio binocular Optika. Además, se midió cualitativamente la relación entre cortical y medular del timo. Se examinó el bazo para determinar la presencia de hiperplasia de células linfoblásticas donde (–) significa pocas; (+) significa moderado; y (++) significa grave.

Análisis estadístico

Se aplicó el procedimiento del Modelo Lineal General del Software de Análisis Estadístico del Instituto SAS (57) utilizando el diseño factorial de dos vías (dos tipos de alimentación por tres niveles de multienzima) de la siguiente manera:

yijk = μ + Ai + βj + (Aβ)ij + eijk

Aquí, μ = media general, Ai = efecto de los tipos de alimento, βj = efecto de los niveles de multienzima, (Aβ)ij = interacción entre los alimentos y las multienzimas, y eijk = error aleatorio.

Antes del análisis, se realizó la transformación de arcoseno para normalizar la distribución de los datos. Para confirmar la homogeneidad (prueba de normalidad) de los datos, se utilizó la prueba de Kolmogorov-Smirnov (K-S) (57). Las medias se consideran diferentes a P ≤ 0,05 mediante la prueba de Student-Newman-Keuls.

Resultados

Rendimiento del crecimiento

La Tabla 2 muestra el efecto de diferentes tipos de dúos y niveles de multienzimas en el crecimiento de pollos de engorde alimentados con SD y LDD durante los días 1 a 38 de edad. Los resultados de la Tabla 2 muestran que la LDD disminuyó significativamente el BWG de los pollos de engorde en comparación con la DE, pero no afectó a la EPEI durante el período experimental. La interacción entre el nivel multienzimático y el tipo de dieta en BWG y EPEI no fue significativa. Los resultados también indicaron que la suplementación multienzimática al 0,1 y 0,2% aumentó de manera significativa y similar el BWG y mejoró la EPEI, en comparación con la dieta control.

TABLA 2. Efecto de diferentes niveles de multienzimas en el crecimiento de pollos de engorde alimentados con dietas estándar y de baja densidad durante los días 1-38 de edad.

Rasgos hematológicos de la sangre

En las tablas 3 y 4 se muestra el efecto de las dietas experimentales sobre las características hematológicas de la sangre y los glóbulos blancos diferenciales, respectivamente. PCV, Hgb, glóbulos rojos, MCV, MCH, MCHC, GLÓBULOS BLANCOS y diferentes tipos de leucocitos no se vieron afectados por el tipo de dieta. Los linfocitos presentaron una LDD significativamente más elevada, mientras que en el caso de los eosinófilos se observó la tendencia opuesta (Tabla 3). La suplementación con multienzimas aumentó significativamente la Hgb, el PCV (Tabla 3), los linfocitos y los monocitos (Tabla 4) en comparación con la dieta de control. Hubo una interacción significativa entre el tipo de dieta y las concentraciones multienzimáticas sobre Hgb, PCV (Tabla 3) y leucocitos (Tabla 4), mostrando que la multienzima aumentó la Hgb y el PCV de la SD de manera escalonada, pero no afectó la LDD, lo que demuestra que el impacto de la multienzima sobre Hgb y PCV depende del tipo de dieta. La respuesta de los linfocitos a la dosis multienzimática fue escalonada (Tabla 4).

TABLA 3. Efecto de diferentes concentraciones de cóctel enzimático sobre los rasgos hematológicos sanguíneos de pollos de engorde alimentados con dietas estándar y de baja densidad.

TABLA 4. Efecto de diferentes concentraciones de cóctel enzimático sobre glóbulos blancos y sus fracciones de pollos de engorde alimentados con dieta estándar y de baja densidad.

Hubo una interacción significativa entre el tipo de dieta y el nivel multienzimático solo en los leucocitos, lo que demuestra que la suplementación con CE a la DE aumentó significativamente los leucocitos pero disminuyó la LDD, lo que demuestra que el impacto de las multienzimas en los leucocitos depende del tipo de dieta.

Componentes bioquímicos de la sangre

Los datos relativos a los componentes bioquímicos de la sangre se muestran en los cuadros 5 y 6. La ALT, la AST y la MAD fueron significativamente mayores en la LDD que en la SD, pero el TAC/MDA (balance de antioxidantes) fue menor (Tabla 5). La proteína total, la albúmina, la α, la β y la γ-globulina, la globulina y la relación globulina/albúmina no se vieron influenciadas significativamente por el tipo de dieta (Tabla 6).

TABLA 5. Efecto de diferentes concentraciones de enzimas sobre las enzimas hepáticas, el malondialdehído sérico en sangre y la capacidad antioxidante total de pollos de engorde alimentados con dieta estándar y de baja densidad.

TABLA 6. Efecto de diferentes concentraciones de cóctel enzimático sobre los constituyentes bioquímicos del suero sanguíneo de pollos de engorde alimentados con dieta estándar y de baja densidad.

La suplementación con multienzimas al 0,1 y 0,2% disminuyó significativamente el ALT, AST, MDA y TAC en comparación con el grupo control (Tabla 5), pero aumentó el equilibrio antioxidante (TAC/MDA). La relación enzimas hepáticas (ALT/AST) y la fosfatasa alcalina no se vieron afectadas significativamente por la suplementación multienzimática. Hubo un efecto significativo de las multienzimas sobre la β-globulina, mostrando mayores valores de los pollitos en la dieta con 0,2 y 0,1% de multienzimas que los de la dieta control sin suplementación multienzimática (Tabla 6). El efecto multienzimático sobre la proteína total fue moderado (P = 0,057).

No hubo una influencia significativa de la interacción entre la suplementación multienzimática y el tipo de dieta sobre el MDA en sangre, las proteínas y las funciones hepáticas reflejadas por las enzimas sanguíneas (ALT, AST, ALT/AST y fosfatasa alcalina). Sin embargo, se observó un efecto significativo de la interacción en el TAC y el balance antioxidante (TAC/MDA). Los resultados indicaron un aumento en la relación TAC/MDA de pollos de engorde suplementados con enzimas de SD y LDD.

Títulos de órganos linfáticos y anticuerpos

La Tabla 7 muestra el efecto de diferentes concentraciones de multienzimas sobre los órganos inmunes y el título de anticuerpos de pollos de engorde alimentados con SD y LDD. El tipo de dieta no tuvo un efecto significativo en los órganos linfáticos, como el bazo, el timo y la bolsa de Fabricio y el HI para el VN. Sin embargo, el IH para la IA fue significativamente mayor en LDD que en SD. Estos órganos también fueron significativamente más altos para los pollos de engorde con dieta suplementada con multienzimas al 0,1 o 0,2% que los que seguían una dieta sin suplementos de EC.

TABLA 7. Efecto de diferentes concentraciones de cóctel enzimático sobre los órganos inmunes y el título de anticuerpos de pollos de engorde alimentados con dieta estándar y de baja densidad.

Hubo interacciones significativas entre la suplementación multienzimática y el tipo de dieta sobre el peso absoluto del bazo y la bolsa de Fabricius y HI para la IA. Los resultados mostraron que la suplementación multienzimática aumentó significativamente el peso del bazo y la bursa de Fabricius y HI para la IA. Sin embargo, la suplementación multienzimática al 0,1% aumentó significativamente el peso del bazo en comparación con el control no suplementado, mientras que la multienzima al 0,2% aumentó el peso absoluto de la bolsa de Fabricio.

Índices inmunológicos

En la Tabla 8 se muestra el efecto de las diferentes dietas experimentales sobre los índices inmunes. Hubo un efecto significativo del tipo de dieta sobre LTT, BACT y PA, mostrando el efecto potenciador de la LDD sobre la respuesta inmune (Tabla 8).

TABLA 8. Efecto de diferentes concentraciones de cóctel enzimático sobre el índice inmunológico de pollos de engorde alimentados con dieta estándar y de baja densidad.

La suplementación con multienzimas aumentó significativamente el IP en comparación con el grupo de control y no tuvo ningún efecto sobre los otros índices inmunes, como LTT, BACT, LYS y PA.

No hubo influencia significativa de la interacción entre la dosis de multienzimas y el tipo de dieta sobre LTT, BACT, LYS, PI y PA.

Estudio histológico

El efecto del tipo de dieta y la suplementación multienzimática sobre la morfología del intestino y la bolsa de Fabricius se muestra en la Tabla 9. El tipo de dieta no tuvo un efecto significativo sobre el diámetro del folículo grande de la bolsa de Fabricio. Hubo un aumento significativo en el diámetro del folículo grande de la bolsa de Fabricio (Figuras 1, 2; Tabla 9) debido a la suplementación de multienzimas al 0,1%, en comparación con las otras concentraciones multienzimáticas. El aumento de la bolsa de Fabricio ascendió al 16,6%, respectivamente. También hubo un aumento insignificante debido a la suplementación con multienzimas al 0,2%.

TABLA 9. Efecto del tipo de dieta y la suplementación con cóctel enzimático de la morfología del intestino y de la bursa de Fabricius.

FIGURA 1. Micrografía de la bolsa de Fabricius de pollos de engorde a los 28 días de edad teñida con H&E (×40) para comparar el diámetro del folículo en diferentes grupos; la distancia entre dos polares foliculares como se muestra en todos los grupos por líneas: (A) pollos de engorde alimentados con una dieta estándar suplementada con un cóctel enzimático al 0,1% ml; (B) pollos de engorde alimentados con una dieta suplementada con 0,2% de multienzima. Se observó un aumento moderado en el diámetro folicular en pollos de engorde alimentados con dieta suplementada con 0,1% de multienzima (A).

FIGURA 2. Micrografía de la bolsa de Fabricius de pollos de engorde a los 28 días de edad teñida con H&E (×40) para comparar el diámetro del folículo en diferentes grupos; la distancia entre dos polares foliculares como se muestra en todos los grupos por líneas: (A) pollos de engorde alimentados con dieta de baja densidad suplementada con 0,1% de multienzima; (B) pollos de engorde alimentados con una dieta suplementada con 0,2% de multienzima. Se observó un aumento moderado en el diámetro folicular en pollos de engorde alimentados con una dieta suplementada con 0,1% de multienzima (A).

No hubo cambios significativos en el bazo y el timo debido al tipo de dieta y a la suplementación multienzimática y su interacción (Figuras 3 y 4). Sin embargo, la relación cortical/medular en el timo disminuyó con el aumento de la edad de los polluelos. Con el tiempo, el timo comenzó a atrofiarse y la disminución de la relación cortical/medular se volvió fisiológica.

FIGURA 3. Micrografía del timo teñida con H&E (×40) para comparar la relación tímica cortical/medular: (A) la relación cortical/medular es de 2:1 como se muestra en todos los grupos a los 28 días de edad; (B) la ración cortical/medular es de 3:1 como se muestra en todos los grupos a los 38 días de edad, lo que se asoció con atrofia tímica fisiológica envejecida.

FIGURA 4. Micrografía del bazo teñida con H&E (×40) del grupo control con histología esplénica normal con arteriola esplénica (flecha fina) con pulpa blanca y roja (flecha gruesa). Todos los grupos mostraron la histología esplénica normal como control.

Discusión

Este trabajo se llevó a cabo para estudiar el efecto de la suplementación de tres niveles multienzimáticos (0, 0,1 y 0,2%) con dos tipos de dieta (SD vs. LDD) sobre la respuesta inmunitaria, la hematología y bioquímica de la sangre, el estado antioxidante y la histología de los órganos de los pollos de engorde durante 1 a 38 días de edad. La tendencia en el uso de LDD en la alimentación de pollos de engorde se ha discutido recientemente y puede ser un posible enfoque para disminuir la presión de crecimiento en el sistema esquelético de las aves y reducir el costo de alimentación y la contaminación ambiental (23, 24, 58). Los datos mostraron que la inclusión de salvado de trigo en las dietas de pollos de engorde al 10% indujo una depresión significativa del crecimiento en BWG y FCR solo durante el período de crecimiento temprano, alcanzando 6.61 y 6.74%, respectivamente, que persistió solo en BWG durante todo el período, alcanzando 5.6%. Esto demostró que la LDD no proporcionó los nutrientes adecuados para el crecimiento muscular durante los diferentes períodos experimentales. Sin embargo, la tolerancia de los pollos de engorde a la composición de la dieta aumentó con el aumento de la edad de los pollitos (17, 59). Los resultados actuales concuerdan con los reportados por Al-Harthi (60) y Attia (16, 17). El aumento del peso corporal y el peso corporal como resultado de la suplementación multienzimática puede deberse a la mayor disponibilidad y absorción de nutrientes como resultado del aumento de la digestibilidad de las dietas ingeridas, como sugieren Choct (22), Attia et al. (18) y El-Kelawy (61). Sin embargo, los efectos de la multienzima dependen de la composición de la dieta y del tipo de enzima (17, 62). Anteriormente se informó que la suplementación multienzimática aumentó la BWG y la FCR, al tiempo que redujo la ingesta de alimento. La multienzima aumentó significativamente el crecimiento durante los 7-21 días de edad, y esto se explica por la existencia de enzimas degradadoras de amilasa y NSPs (23, 60, 63, 64). La adición de enzimas exógenas que hidrolizan el NSP de los ingredientes vegetales en las dietas para monogástricos mejora la disponibilidad de energía y el uso de nutrientes y, por lo tanto, mejora la tasa de conversión alimenticia (65). El aumento en la liberación de nutrientes debido a la suplementación enzimática resultó en un mayor nutriente disponible para la absorción, como lo demuestra el aumento en la longitud de las vellosidades intestinales y, por lo tanto, para la reacción bioquímica a favor de la reacción anabólica y la acumulación muscular (18) y también para la función inmune (21, 25).

El uso de LDD mejoró la LTT y la PA, lo que indica una mayor inmunidad. Esta mejora de la inmunidad podría atribuirse a la redistribución de los nutrientes hacia la inmunidad en lugar del crecimiento. El crecimiento disminuyó debido a la alimentación con LDD y, por lo tanto, aumentó la disponibilidad de nutrientes para la respuesta fisiológica, la inmunidad y la utilización de antioxidantes para eliminar los radicales libres resultantes de las reacciones enzimáticas y no enzimáticas debido a la disminución de las demandas de nutrientes para el crecimiento. Por ejemplo, la relación TAC/MDA (equilibrio antioxidante) aumentó significativamente debido a la alimentación con una dieta suplementada con enzimas. Este aumento reflejó la disminución significativa de los antioxidantes (TAC) para su uso en la protección celular de los radicales libres (7, 25).

Se ha informado que la inclusión de salvado de trigo en la dieta y particularmente los polisacáridos son antioxidantes, inmunomoduladores, antiinflamatorios, antitusivos, anticancerígenos y antimutagénicos (1, 66-68). Además, se ha demostrado que el salvado de trigo y los arabinoxilanos mejoran la fagocitosis de los macrófagos en modelos animales. También estimulan la respuesta humoral en los pollos. Mejoró la producción de títulos totales de anticuerpos anti-SRBC de IgS, IgG e IgM en los días 7 y 14 PPI y PSI de SRBC, en relación con el estándar (69, 70). La administración de arabinoxilanos en la dieta aumentó significativamente la respuesta de anticuerpos anti-SRBC en pollos a los que se administraron arabinoxilanos y sugirió un aumento de la respuesta inmune humoral, lo que puede atribuirse a un mayor potencial de un animal para encontrarse con agentes patógenos (71). Además, el salvado de trigo es rico en la enzima fitasa, que puede mejorar la disponibilidad de nutrientes por parte de los pollos, como proteínas, energía y minerales (17, 72).

Curiosamente, los resultados actuales mostraron que la CE mejoró el EPEI de los pollos de engorde. Este resultado está en línea con los mostrados por Al-Harthi (60) y Attia (16, 17). La mejoría de la EPPI debido a la suplementación con AE coincidió con una mayor longitud de las vellosidades en el grupo con suplementación multienzimática al 0,1%; esto está en línea con los hallazgos de Choct (22) y Attia et al. (18). Sin embargo, el efecto de la multienzima depende de la composición de la dieta y del tipo de enzima (17, 62). El efecto de la suplementación enzimática en el rendimiento de los animales podría ser el resultado del efecto de la amilasa y las enzimas que degradan las NSP (23, 60, 63, 64). La adición de enzimas exógenas que hidrolizan el NSP de los ingredientes vegetales en los piensos para monogástricos mejora la disponibilidad de energía y el uso de nutrientes y, por lo tanto, mejora el FCR (65). Además, Gao et al. (73) informaron que la suplementación con xilanasa de las dietas a base de trigo para gallos mejoró significativamente la producción de respuesta de anticuerpos séricos al VEN como medio de respuesta humoral. Por el contrario, Basmacioglu Malayoglu et al. (74) revelaron que la suplementación con enzimas degradadoras de NSP no tuvo un efecto significativo sobre la respuesta inmune representada por títulos de IgG e IgM. Además, Khaksar et al. (75) encontraron que el peso relativo de los órganos inmunes (timo, bazo y la bolsa de Fabricio) no estaba influenciado por la suplementación enzimática.

Además, la intervención de la composición de la dieta con enzimas fue estudiada recientemente por Head et al. (76) quienes sugirieron que si los pollos de engorde se suplementan con linaza, la digestibilidad de los nutrientes y la disponibilidad de AG n-3 se verán limitadas debido a la presencia de polisacáridos no amiláceos (NSP), al afectar el proceso genético durante el metabolismo de los lípidos en el hígado. Los resultados revelaron que la adición de enzimas a las dietas suplementadas con un 10% de linaza disminuyó el ácido araquidónico y el AG n-6 de cadena larga total. Los tratamientos dietéticos con linaza y enzimas aumentaron la regulación de los genes diana de PPARα CPT1A y ACOX1, al tiempo que redujeron la expresión de genes relacionados con la síntesis de AG de novo (76). Además, Seidavi et al. (77) demostraron que la suplementación de la dieta con una mezcla de probióticos y enzimas no tuvo ningún efecto sobre la respuesta humoral contra la IA y el VEN en el día 42. Hubo una diferencia significativa de IgG después del segundo desafío con los SRBC (P = 0,003). Se encontró un menor peso corporal de las aves en la mayoría de los grupos tratados, en relación con el estándar (P = 0,031). El peso absoluto y relativo del bazo fue significativamente diferente en comparación con el grupo control (P = 0,003 y P = 0,001, respectivamente). Los pesos del timo y de la bolsa de Fabricio no eran diferentes (77). Un estudio adicional fue realizado por Abdel-Hafeez et al. (78) quienes encontraron que el uso de cáscaras de papa al 15% y pulpa de remolacha azucarera al 7,5% disminuyó el peso corporal. La inclusión enzimática mejoró significativamente el peso corporal en las cáscaras de patata y la pulpa de remolacha azucarera. Los niveles séricos de colesterol total y colesterol de lipoproteínas de baja densidad se redujeron en todos los grupos experimentales. Además, el contenido de grasa de la canal se redujo utilizando las cáscaras de patata y la pulpa de remolacha azucarera, con o sin enzima (78). Esto indica que la suplementación con enzimas afecta la bioquímica sanguínea de los pollos de engorde (61) y, por lo tanto, la calidad de la carne mejoró debido a la disminución de la grasa de la canal (18).

Estos resultados sugieren que es posible diluir los perfiles nutricionales de las dietas de los pollos de engorde durante las fases de crecimiento y engorde sin efectos negativos sobre el EPEI y la EC, al tiempo que se mejora la respuesta inmune y la eficiencia económica. Estos resultados concuerdan con los reportados por Abudabos (23).

El uso de LDD en el presente estudio no afectó negativamente a la longitud de las vellosidades. La relación entre la morfología intestinal y el tipo de dieta fue reportada en la literatura; el uso de cereales con un alto nivel de NSP puede aumentar el tamaño del tracto gastrointestinal (72, 79). Se ha reportado una correlación positiva significativa entre el nivel de arabinoxilano en trigo y los pesos relativos del duodeno, yeyuno e íleon (80). Se sabe que la composición de la dieta puede inducir cambios microscópicos en la mucosa intestinal, y es posible que los niveles de NSP en la dieta también puedan afectar la morfología del tracto gastrointestinal (81). Iji (82) informó que la profundidad de la cripta tanto del yeyuno como del íleon mejoró debido a la suplementación con goma guar y goma xantana, lo que indica que la NSP puede estimular el recambio celular del tracto gastrointestinal. El aumento de la profundidad de las criptas indica un aumento de la estimulación de las células vellosas y, por lo tanto, un aumento de los nutrientes que se absorben y, por lo tanto, son utilizados por el tracto gastrointestinal. Esto indica que el tipo de cereal afecta el tamaño del tracto gastrointestinal y la morfología del intestino (83).

Es bien sabido que el aumento de la corteza en relación con la relación con la médula aumentó el número de linfoblastos T y aumentó el linfocito T, lo que se refleja en la estimulación de la inmunidad celular (84-86).

Un estudio reciente de Woyengo et al. (87) mostró que el uso de amilasa, NSPasa o una combinación de amilasa y NSPasa en la dieta basal suplementada con fitasa mejoró aún más (P < 0,05) la digestibilidad del íleon a 63,4, 69,9 y 67,3%, respectivamente. Sin embargo, el valor de energía metabolizable aparente corregido por nitrógeno de la dieta no se vio afectado por la adición de fitasa, amilasa o una combinación de amilasa y NSPasa. Woyengo et al. (87) concluyeron que la adición de amilasa y NSPasa a las dietas suplementadas con fitasa de pollos de engorde es beneficiosa para mejorar la energía metabolizable aparente corregida por nitrógeno. En otro estudio realizado por Sateri et al. (88), no mostraron efectos significativos de la harina de aceituna y las enzimas sobre el rendimiento del crecimiento y sobre la microflora del ciego. Los títulos de anticuerpos contra el virus de la bronquitis infecciosa (IBV) y la enfermedad de Gumboro fueron más altos en las aves alimentadas con harina de aceituna al 4%. La suplementación de la dieta con enzimas no afectó a los parámetros antes mencionados (88).

Los presentes resultados indican que la suplementación con CE mejoró la inmunidad de los pollos de engorde medida por los cambios en los órganos. Esto coincidió con un aumento del diámetro del folículo grande de la bolsa de Fabricio para el grupo suplementado con multienzimas al 0,1%. El aumento en el diámetro folicular de la bolsa de Fabricius indica un aumento en el número de linfoblastos B que conduce a la formulación de linfocitos B que internamente forman anticuerpos. Esto refleja la estimulación de la inmunidad humoral debido al aumento de los nutrientes disponibles para la formación de anticuerpos (89, 90). Además, el índice fagocítico aumentó de manera similar con la suplementación de concentraciones multienzimáticas de 0,1 y 0,2%. El mecanismo o mecanismos por los que la suplementación con salvado de trigo y/o enzimas afectó positivamente a la inmunidad de los pollitos puede implicar una mejora de la salud intestinal debido a la disminución de la microbiota dañina en el intestino posterior, el aumento de la longitud de las vellosidades intestinales y/o el aumento de los nutrientes disponibles para la función inmunitaria (21, 24, 25, 73, 89, 90). A este respecto, Gao et al. (73) informaron que la alimentación de gallos con dietas a base de trigo suplementadas con xilanasa aumenta significativamente los anticuerpos séricos contra el VVEN, lo que indica que los suplementos enzimáticos mejoran la respuesta humoral debido a una mayor utilización de nutrientes para la función inmune. Pero en otro estudio, no hubo un efecto significativo en la respuesta humoral (IgG e IgM) con la suplementación con enzimas que degradan NSP (74). Además, Khaksar et al. (75) encontraron que el peso relativo de los órganos inmunes (timo, bazo y la bolsa de Fabricio) no estaba influenciado por la suplementación enzimática. Esta contraindicación en la literatura publicada indica que la inmunidad de las aves es un concepto complejo que se ve afectado por la composición de la dieta, la edad y el estrés de los animales (24, 25, 84).

En conclusión, la suplementación multienzimática al 0,1 o al 0,2% de SD o LDD mejoró el índice de producción al tiempo que mejoró la respuesta inmunitaria de los pollos de engorde durante la edad de 1 a 38 días.

Declaración de disponibilidad de datos

Los conjuntos de datos generados para este estudio están disponibles previa solicitud al autor correspondiente.

Declaración de Ética

El estudio en animales fue revisado y aprobado por el Comité Departamental de Producción Animal y Avícola, los decretos oficiales del Ministerio de Agricultura de Egipto relativos al bienestar animal son el Nº 27 (1967).

Contribuciones de los autores

Todos los autores enumerados han hecho una contribución sustancial, directa e intelectual al trabajo, y lo han aprobado para su publicación.

Financiación

Este artículo fue financiado por el Decanato de Investigación Científica (DSR) de la Universidad Rey Abdulaziz, Jeddah; los autores, por lo tanto, agradecen el apoyo técnico y financiero de DSR.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto de intereses.

El editor encargado declaró una coautoría pasada con uno de los autores YA.

Reconocimientos

Los autores expresaron su agradecimiento a la dirección del Instituto de Investigación Científica de Kuwait (KISR) por su amable ayuda y apoyo.

Referencias