1 Introducción

El virus de la pseudorrabia (PRV) es extremadamente infeccioso en los mamíferos y supone un riesgo de transmisión a los seres humanos (1) y considerables problemas de salud pública. El PRV puede inhibir la inmunidad innata del huésped y promover la replicación viral (2). Por lo tanto, centrarse más en la regularidad de la inmunidad es importante para investigar el efecto de la PRV. Para la inmunidad humoral, las inmunoglobulinas IgG, IgA e IgM son importantes para la inmunidad contra las infecciones virales, ya que la sIgA previene la invasión local del virus y la IgG y la IgM bloquean la propagación del virus a través de la sangre al neutralizar y opsonizar los virus. En cuanto a la inmunidad celular, los linfocitos T tienen funciones antivirales (3), antifúngicas e inmunomoduladoras (4). La prueba de transformación de linfocitos T es una prueba definitiva para detectar el estado de la función inmune celular, donde las tasas más altas de conversión de linfocitos T reflejan un papel más pronunciado de los linfocitos T en el aumento de la inmunidad (5). Además, las células T CD4 coordinan la respuesta inmunitaria y secretan diferentes linfocitos que actúan sobre las células presentadoras de antígenos circundantes (6), las células T CD8 tienen funciones asesinas e inhibidoras que son cruciales para el sistema inmunitario (7); por lo tanto, la relación CD4/CD8 puede actuar como un indicador de la capacidad inmune (8). También existen algunas diferencias entre los diferentes períodos de la respuesta inmune, durante la fase reactiva, la interleucina (IL)-2 y la IL-4 promueven la activación, proliferación y diferenciación de las células T y B (9), luego, en la fase práctica, el IFN-γ puede activar los macrófagos, mejorar sus actividades fagocíticas y destructoras, e inhibir la replicación viral (10). Además, los receptores tipo Toll (TLR) poseen actividades biológicas antivirales y son componentes importantes del sistema inmunitario intrínseco. TLR3 y TLR7 en endosomas reconocen ácidos nucleicos (11); TLR3 reconoce principalmente ARN viral bicatenario, lo que sugiere que tiene importantes funciones antivirales (12), mientras que TLR7 reconoce ARN viral monocatenario. Estos TLR son esenciales para proteger el cuerpo contra las infecciones (13). En resumen, esta inmunidad nos ayuda a evaluar los efectos inmunomoduladores de los fármacos.⁺⁺⁺⁺

Scutellaria baicalensis Georgi (SG) también se conoce como escutelaria china o Huangqin y es una hierba perenne de la familia Lamiaceae Martinov (14). Las aplicaciones clínicas recientes de las escutelarias chinas incluyen el tratamiento de muchas enfermedades, como la inflamación (15, 16), la hipertensión (17), las enfermedades cardiovasculares (18), la neurodegeneración (19) y los tumores (20). Los estudios actuales han confirmado que los polisacáridos tienen una amplia gama de efectos terapéuticos y propiedades de prevención de enfermedades, y que la mayoría de los polisacáridos medicinales tradicionales chinos actúan como potenciadores inmunitarios in vitro e in vivo. Además, el rizoma seco de Rodgersia sambucifolia Hemsl (RH), conocido como Yantuo o Maoqinggang, es eficaz para eliminar el calor, desintoxicar, disipar el viento y drenar la humedad; Tiene propiedades astringentes y se usa a menudo para tratar resfriados, dolores de cabeza, reumatismo, dolor óseo y hemorragias traumáticas (21). Los flavonoides también tienen importantes efectos inmunomoduladores y pueden desempeñar funciones antivirales y antiinfecciosas. Sin embargo, no se ha reportado el efecto del polisacárido de Scutellaria baicalensis Georgi (SGP) y el flavonoide de Rodgersia sambucifolia Hemsl (RHF) sobre el PRV.

Con el fin de descartar la eficacia de la medicina china contra el PRV, investigaciones anteriores de nuestro grupo evaluaron la seguridad y los efectos inmunológicos de los extractos de RH, Angélica, SG y la raíz de Isatis indigotica procedente de Yunnan. Para este estudio se seleccionaron RHF y SGP con efectos inmunomoduladores superiores para investigar los efectos terapéuticos e inmunomoduladores de RHF y SGP en lechones infectados con PRV.

2 Métodos

2.1 Animales de laboratorio y fuentes de virus

Se seleccionaron 50 cerdos híbridos Saba × Duroc de 15 ± 3 días de edad de la zona de la montaña Luquan de la ciudad de Kunming, provincia de Yunnan. Las pruebas para los antígenos del síndrome respiratorio y reproductivo porcino (PRRSV), PRV, circovirus porcino tipo 2 (PCV2) y virus de la peste porcina clásica (PPC) fueron negativas. Todos los lechones nacieron de cerdas no vacunadas y dieron negativo para PRV, PCV2, PRRSV, CSRF y parvovirus porcino utilizando un método de reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se determinó que los lechones estaban libres de anticuerpos contra el PRV (gE) antes del estudio utilizando kits de ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA). Los lechones se criaron en condiciones normales de luz diurna y se les proporcionó alimento comercial estándar y acceso sin restricciones al agua. La cepa PRV gD YN (22) se aisló de los pulmones de cerdos infectados en la provincia de Yunnan y se utilizó en este estudio. El título de PRV fue de 10^5.5 TCID₅₀/0,1 mL (línea celular PK-15).

2.2 Preparación de flavonoides Rodgersia sambucifolia Hemsl y polisacárido Scutellaria baicalensis Georgi

2.2.1 Rodgersia sambucifolia Flavonoides de Hemsl

Raíces secas de trébol de Rodgersia sambucifolia Hemsl. se molieron y se remojaron en etanol al 60% durante 24 h a una proporción sólido-líquido de 1:60. La mezcla se sonicó durante 15 minutos antes de colocarse en un baño de agua a 70°C durante 3 h. El etanol se evaporó y el residuo se secó. El contenido de flavonoides del extracto fue de 41,1%, el cual se determinó mediante el método descrito anteriormente (23).

2.2.2 Polisacárido de Scutellaria baicalensis Georgi

Las raíces de Scutellaria baicalensis se secaron, trituraron y hirvieron en agua destilada a una proporción de material a líquido de 1:50 durante 20 min. El residuo se eliminó del filtrado, que luego se mezcló con etanol al 95% y se mantuvo a 4 °C durante la noche. El sobrenadante se eliminó para obtener un precipitado floculado, que se secó a un peso constante a 55°C para obtener los polisacáridos de baicalina. El contenido de polisacáridos fue de 40,3%, el cual se determinó mediante un método previamente descrito (24).

2.3 Ensayo de proliferación linfocitaria

Se aislaron linfocitos periféricos de lechones libres de anticuerpos PRV y anti-PRV, como se describió anteriormente (25). Se utilizó la tinción con azul de tripano para realizar recuentos celulares de células cultivadas en suspensiones de solución completa RPMI 1640 sin suero. Utilizamos una densidad celular completa de 5 × 10⁹ células/mL en nuestros experimentos. Se utilizaron un total de cuatro grupos experimentales (I, II, III y IV; Tabla 1) y cada grupo experimental se repitió cuatro veces. Las células se incubaron durante 44 h bajo 5% de CO₂ antes de que se añadieran 5 μL de MTT a cada pocillo en condiciones de oscuridad. Después de una incubación de 4 h, se midió la absorbancia a 570 nm con un espectrofotómetro UV. El experimento se repitió tres veces.

Tabla 1. Agrupamiento experimental.

El índice de estímulo (IS) se calculó de la siguiente manera (26):

2.4 Diseño experimental de infección por PRV en lechones

Después de 1 semana de domesticación, 50 lechones se dividieron aleatoriamente en cinco grupos con 10 lechones en cada grupo. El primer grupo fue el control, en el que a los lechones se les administró 1 mL de suero fisiológico por vía intramuscular. El segundo grupo incluyó lechones infectados con PRV (PRV), y el tercer y cuarto grupo estaban compuestos por lechones infectados con PRV tratados con 200 mg/kg de HRF (PRV + RHF) o 200 mg/kg de SGP (PRV + SGP), respectivamente. El quinto grupo incluyó lechones infectados por PRV tratados con 100 mg/kg de RHF y 100 mg/kg de SGP (PRV + RHF + RHF).

En el día 0, a los lechones de los grupos 2 a 5 se les administró 1 ml de gotas nasales de PRV y el grupo de control recibió PBS. Después de la infección, los grupos 3, 4 y 5 recibieron administración intranasal (i.g.) de los tratamientos correspondientes una vez al día durante 21 días consecutivos, mientras que el agua destilada se administró por vía intragástrica a los lechones de los grupos 1 y 2.

2.4.1 Declaración ética animal

Todos los experimentos realizados en este estudio fueron aprobados por el Comité Internacional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Agrícola de Yunnan (código de permiso: YAUACUC06; fecha de publicación: 10 de julio de 2017). El estudio cumplió con las directrices de los comités institucionales, administrativos y de ética para animales de laboratorio.

2.5 Efecto terapéutico

2.5.1 Evaluación de los síntomas clínicos

Se administró 1 mL de PRV o PBS por vía intranasal a cada lechón y los síntomas clínicos se registraron y evaluaron diariamente (Tabla 2).

Tabla 2. Evaluación de los síntomas clínicos.

2.5.2 Evaluación de la lesión patológica

A los 14 días después de la infección (dpi), los lechones fueron sacrificados con una inyección intravenosa de 100 mg/kg de pentobarbital sódico y los tejidos del hígado, el bazo, los pulmones y los riñones se recolectaron y conservaron en paraformaldehído al 10%. Cada muestra de tejido se cortó en secciones de 5 mm × 5 mm × 3 mm y se procesó siguiendo los procedimientos estándar. Secciones de tejido fijado en formol e incluido en parafina (FFPE) de 5 μm de espesor se tiñeron con hematoxilina y eosina (H&E) para microscopía (Motic China Group Co., Ltd.). La lesión pulmonar se puntuó mediante la puntuación de Smith (27) (Tabla 3), la lesión hepática se puntuó mediante la puntuación patológica de Suzuki (28) (Tabla 4) y la lesión del bazo se evaluó mediante un sistema de puntuación de los cambios patológicos observados en los lechones infectados con PRV (Tabla 5). La lesión renal se evaluó mediante el sistema de clasificación de Haas (Tabla 6).

Tabla 3. Puntuación de lesión pulmonar.

Tabla 4. Puntuación de lesión hepática.

Tabla 5. Puntuación de lesión del bazo.

Tabla 6. Puntuación de lesión renal.

2.6 Efecto de inmunorregulación

2.6.1 Ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas

Se utilizó un kit específico de ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) (Shanghai Enzyme-linked Biotechnology Co., Ltd., China) para detectar los niveles séricos de anticuerpos IgA, IgM, IgG, IL-2, IL-4, IFN-γ, CD4, CD8 y sIgA siguiendo las instrucciones del fabricante.⁺⁺

2.6.2 PCR cuantitativa con transcriptasa inversa

El ARN total se aisló del tejido del bazo utilizando el reactivo TRIzol (Takara, China) y el ADNc se sintetizó utilizando el kit de síntesis de ADNc de primera cadena (Takara, China). La PCR cuantitativa con transcripción inversa (qRT-PCR) se realizó utilizando un SYBR PrimeScriptTM RT-PCR Kit II de un solo paso (Takara Biotech Co., Ltd., China). β-actina se utilizó como gen de referencia para detectar la expresión de TLR3 y TLR7 y se cuantificó mediante el gen 2^(−ΔΔCt) Método de análisis estadístico. Cada ensayo se repitió tres veces. Los cebadores utilizados en este estudio fueron los siguientes:

β-actina: (F) TCTGGCACCACACCTTCT, (R) TGATCTGGGTCATCTTCTCAC

TLR3: (F) TCCAACTAACAAACCAGGC, (R) ACATCCTTCCACCATCT

TLR7: (F) TGCTTTCCAGTTGCGACATC, (R) CAGACAAGCCACACAGCGTC.

2.7 Análisis estadístico

Los datos se expresan como media ± desviación estándar. Se realizó un análisis de varianza de una vía (ANOVA), seguido de la prueba de comparación múltiple de Student-Newman-Keul para comparar las medias. Se consideró estadísticamente significativo un valor de p <0,01. Los análisis se realizaron con el paquete de software SYSTAT 9 (SPSS 20).

3 Resultados

3.1 RHF y SGP alivian los síntomas clínicos de la pseudorrabia

Después de 3 días después de la infección (dpi), la temperatura rectal de los cerdos en los cuatro grupos infectados por PRV fue mayor que la del grupo control (p ≤ 0,01). A partir de los 9 dpi, la temperatura rectal disminuyó en el grupo tratado (p ≤ 0,05) antes de estabilizarse a los 10 dpi (p > 0,05), mientras que la del grupo PRV se mantuvo por encima de la del grupo control (p ≤ 0,01) (Figura 1A). A los 14 dpi, todos los lechones del grupo PRV murieron, con una tasa de mortalidad del 100%, mientras que los de los grupos de tratamiento del 60% (6/10) (Figura 1C). Estos resultados sugirieron que la RHF y la SGP aliviaron los síntomas de fiebre en los lechones después de la infección por PRV, sin diferencias significativas entre las condiciones de tratamiento.

Figura 1. Los signos clínicos de los lechones infectados por el virus de la pseudorrabia. (A) El cambio de temperatura rectal de cada grupo. (B) Signos clínicos grado de los lechones de cada grupo. C) El número de lechones supervivientes en cada grupo.

A los 9 dpi, los lechones del grupo PRV eran incapaces de mantenerse en pie, presentaban parálisis de las extremidades y finalmente murieron a los 14 dpi. En el grupo de RHF, las puntuaciones de los síntomas clínicos disminuyeron inicialmente a 2 puntos 10 ppp y volvieron a la normalidad a 13 y 18 ppp. La puntuación en el grupo RHF + SGP disminuyó a 2 puntos a 13 ppp, luego a 1 punto a 14 ppp antes de volver a la normalidad a 20 ppp. Por el contrario, las puntuaciones en el grupo SGP cayeron a 1 a los 12 ppp y luego volvieron a la normalidad a los 16 ppp (Figura 1B). En general, los síntomas clínicos de los lechones infectados con PRV se aliviaron en los tres grupos de fármacos, con el mayor efecto observado en el grupo de SGP en comparación con el de los grupos de tratamiento RHF o RHF + SGP.

3.2 Los tratamientos con RHF y SGP reducen el daño patológico en lechones infectados con PRV

Las secciones de tejido pulmonar teñidas con H&E del grupo PRV mostraron hemorragia focal, estenosis alveolar, exudación serosa, infiltración de células inflamatorias tumorales y desprendimiento de células epiteliales en comparación con las del grupo control. Las secciones de tejido hepático del grupo PRV mostraron una disposición desordenada de los cordones hepatocitarios, hemorragia severa entre hepatocitos, necrosis hepatocitaria, vacuolas nucleolares y ensanchamiento de los senos hepáticos; mientras que las secciones de bazo mostraron una estructura dispersa en el centro germinal, necrosis parcial de linfocitos, exudado seroso en el tejido intersticial y aumento de eritrocitos mieloides rojos; y las secciones renales mostraron eritrocitos inflamatorios en el glomérulo y la cápsula renal, desprendimiento de las células epiteliales en los túbulos renales y estructuras del glomérulo, túbulos distales y túbulos proximales estaban alteradas. En los grupos de tratamiento, se redujeron la exudación pulmonar y la hemorragia, se redujo la hemorragia del tejido hepático, el cordón hepático estaba bien dispuesto, la estructura del bazo estaba intacta, el centro germinal era denso y la estructura renal estaba intacta. En conjunto, estos resultados mostraron que tanto la RHF como la SGP aliviaron el daño patológico en el corazón, el hígado, el bazo, los pulmones y los riñones de los lechones infectados por PRV (Figuras 2A-D).

Figura 2. Imágenes histopatológicas de tejidos pulmonares, hepáticos, bazoles y renales en diferentes grupos experimentales y la puntuación de lesión patológica. (A) Imágenes histopatológicas del pulmón. (B) Imágenes histopatológicas del hígado. (C) Imágenes histopatológicas del bazo. (D) Imágenes histopatológicas del riñón. (E) Las puntuaciones de lesiones patológicas. (F) Correlación entre el daño patológico y la puntuación de lesión dentro del mismo tejido. La flecha apunta al sitio de la lesión. Los números sobre las flechas indican exudación serosa en el intersticio alveolar; engrosamiento de la pared alveolar; aumento de glóbulos rojos; trastorno de la médula hepatocitaria, agrandamiento de la sinusoides hepática; abundantes células plasmáticas; cambios en la estructura contorneada distal del túbulo; la estructura de los túbulos contorneados distales y los túbulos contorneados proximales son difusas; infiltración linfocitaria y eritrocitosis. (Tinción de hematoxilina y eosina, 400× aumento). (n = 10 pulgadas por grupo).

Las puntuaciones de daño patológico mostraron que el daño a los pulmones, hígado, bazo y riñones de los lechones infectados con PRV se alivió en los tres grupos de fármacos en comparación con los de los grupos de control no tratados (p ≤ 0,01) (Figura 2E), y las lesiones patológicas se correlacionaron con las puntuaciones de daño dentro del mismo tejido (Figura 2F).

3.3 La SGP mejora eficazmente las tasas de conversión de linfocitos T

Se investigó el efecto de SGP y RHF en la conversión de linfocitos T en lechones infectados con PRV. El índice de estimulación (IS) de 1,25 mg/mL y 2,5 mg/mL de los tratamientos con PSG fue significativamente mayor que el de las concentraciones de 5 mg/mL en lechones infectados con PRV (p ≤ 0,01) (Figura 3A). Estos resultados indicaron que la PSG mejora eficazmente las tasas de conversión de linfocitos T.

Figura 3. (A) El índice de estimulación en cada grupo. (B) Nivel de IgM en cada grupo. (C) Nivel de IgG en cada grupo. (D) Nivel de IgA en cada grupo. (E) nivel de sIgA en cada grupo. (F) Relación CD4/CD8 en cada grupo. (G) Nivel de IFN-γ en cada grupo. (H) Nivel de IL-2 en cada grupo. (I) Nivel de IL-4 en cada grupo. (En cada punto de tiempo seleccionado, se analizaron todos los lechones vivos, n = 10 en por grupo).⁺⁺

3.4 Los tratamientos con RHF y SGP aumentan la concentración de inmunoglobulinas

Los niveles de IgM, IgG, IgA e IgA en los grupos experimentales fueron significativamente diferentes a los de 3 dpi (p ≤ 0,01 o p ≤ 0,05). Estas diferencias fueron mayores a los 10 dpi (p ≤ 0,01), después de lo cual la IgM, la IgG y la IgA disminuyeron, mientras que la sIgA primero disminuyó y luego aumentó en comparación con el grupo control (Figuras 3B-E). Tanto la RHF como la SGP aumentaron la concentración de inmunoglobulinas en la sangre y el tejido pulmonar, y la SGP mostró una mayor capacidad para aumentar los niveles de inmunoglobulinas, lo que indica una mejora de la inmunidad y la inmunidad antiinfección de la mucosa en los lechones infectados con PRV.

3.5 La SGP mejora la relación CD4/CD8 sérica y la producción de citoquinas en lechones infectados con PRV⁺⁺

Se observaron diferencias significativas en el cociente CD4/CD8 en el grupo SGP a 10 dpi en comparación con el grupo control (p ≤ 0,01) (Figura 3F). Se observaron diferencias significativas en los niveles de IFN-γ, IL-2 e IL-4 en todos los grupos experimentales a los 3 dpi, con las mayores diferencias observadas a los 10 dpi en comparación con el grupo control (p ≤ 0,01). Estos resultados mostraron que la PSG mejoró la relación CD4/CD8 sérica y la producción de citoquinas en lechones infectados con PRV (Figuras 3G-I).⁺⁺⁺⁺

3.6 La SGP aumenta la expresión de TLR3 y TLR7 en el bazo de los lechones infectados con PRV

Se observó un aumento significativo en los niveles de ARNm de TLR3 en lechones infectados con PRV tratados con y sin SGP y RHF a los 3 dpi (p ≤ 0,01), con el mayor aumento observado a los 10 dpi en comparación con los controles (p ≤ 0,01). Estos aumentos fueron seguidos por una disminución gradual en los niveles de TLR3. Los niveles de TLR7 primero disminuyeron, luego aumentaron y luego disminuyeron nuevamente después del tratamiento con SGP y RHF, con la expresión más alta observada a 10 dpi en comparación con los controles. Tanto el tratamiento con RHF como con SGP aumentaron los niveles de expresión relativa de TLR3 y TLR7 en el bazo de lechones infectados con PRV; sin embargo, este efecto fue más significativo en el grupo de PEC (Figuras 4A, B).

Figura 4. (A) Nivel TLR3 en cada grupo. (B) Nivel TLR7 en cada grupo. (n = 10 pulgadas por grupo).

4 Discusión

Varios estudios han demostrado que las medicinas tradicionales chinas tienen efectos antivirales y de mejora del sistema inmunológico (29). La RH se utiliza para tratar diversas enfermedades inmunitarias, como tumores, asma y artritis reumatoide (21), aunque rara vez se ha informado del valor medicinal de estos principios activos (30). SG es la raíz seca de S. scutellariae de la que se extrae la baicalina del subproducto de las flavonas de Scutellaria. Estos compuestos son relativamente fáciles de obtener y demuestran actividades antitumorales, efectos reguladores de la glucosa en sangre, regulación lipídica, propiedades antioxidantes, activaciones antibacterianas y efectos antiinflamatorios e inmunomoduladores (31, 32). La prevención y el tratamiento del PRV plantean desafíos considerables para la cría industrial de cerdos y no se han notificado los efectos de la RSH y el SGP en los lechones infectados por el PRV (véase la Figura 4).

Inicialmente, fermentamos y extrajimos los componentes efectivos de cuatro hierbas nativas de Yunnan (SG, RH, Angélica y la raíz de Isatis indigotica) y descubrimos que SG y RH eran las hierbas medicinales más efectivas. Buscamos identificar la hierba medicinal con efectos terapéuticos e inmunomoduladores óptimos en lechones infectados con PRV y determinar si su administración individual o combinada es más efectiva en el tratamiento de la infección por PRV. Se utilizaron puntuaciones de síntomas clínicos y lesiones patológicas para evaluar los efectos terapéuticos de los tratamientos experimentales en lechones infectados con PRV y ensayos de transformación de linfocitos, y se evaluaron inmunoglobulinas, citocinas, células T y receptores tipo Toll relevantes para demostrar los efectos inmunomoduladores de los tratamientos probados.

Las puntuaciones de los síntomas clínicos y de las lesiones patológicas mostraron que los tres grupos de tratamiento aliviaron los síntomas clínicos y las lesiones patológicas de la pseudorrabia en lechones infectados con PRV. Xiong et al. (33) calcularon la tasa de curación clínica de pacientes con COVID-19 utilizando una fórmula herbal china que contenía Scutellaria y encontraron que las puntuaciones clínicas y de los síntomas de la fiebre y los biomarcadores inflamatorios se reducían. Ming et al. (21) también encontraron que los polisacáridos de astrágalo aliviaban la lesión pulmonar inflamatoria inducida por lipopolisacáridos al alterar la microbiota intestinal en ratones, mientras que Li et al. (31) informaron que el compuesto flavonoide, kaverol, inhibe la replicación de PRV en el cerebro, los pulmones, los riñones, el corazón y el bazo, aliviando los cambios patológicos en estos órganos.

Los niveles de IgM, IgG, IgA, sIgA, IL-2, IL-4, TLR3 y TLR7 mostraron que tanto RHF como SGP mejoraron la inmunidad de los lechones infectados con PRV; sin embargo, el PEC tuvo un efecto más fuerte que el RHF. En experimentos de transformación de linfocitos, encontramos que los tratamientos con 1,25 mg/mL y 2,5 mg/mL de SGP podrían mejorar la conversión de linfocitos, lo que se indica por el aumento de la concentración de inmunoglobulinas en los lechones que recibieron tratamiento con SGP en comparación con la de los lechones no tratados. La baicalina puede aumentar significativamente los niveles de IgA, IgG e IgM en el suero de ratones (23), lo que es similar a los resultados del presente estudio. Las citoquinas proinflamatorias y los altos niveles de interferón en la mucosa de las vías respiratorias pueden desencadenar y mantener la inflamación local y pueden provocar alteraciones en la respuesta inmunitaria protectora de la mucosa. Encontramos que los niveles de sIgA en los lechones tratados a 21 dpi aumentaron en lugar de disminuir. Planteamos la hipótesis de que esto estaba relacionado con niveles más altos de interferón que agravaban la respuesta inflamatoria de la mucosa (26, 34). Tanto la RHF como la SGP aumentaron la proporción de células CD4/CD8 y los niveles de citocinas en el suero de los lechones infectados con PRV, aunque la SGP fue más efectiva. Estudios futuros examinarán la relación entre el interferón y la infección por PRV.⁺⁺

El tratamiento con SGP de lechones infectados con PRV mostró un mayor aumento en la expresión relativa de ARN de TLR3 y TLR7 en tejidos aislados del bazo, lo que indica además que el tratamiento con RHF y SGP mejoró la función inmunomoduladora en lechones infectados con PRV y que el efecto del tratamiento con SGP fue mayor que el de RHF. También hay algunos artículos actuales que sugieren que el aumento de TLR4 en formulaciones herbales que contienen baicalina también se asocia con estallidos inflamatorios (35).

La mayoría de los marcadores de inflamación mostraron una mayor elevación a los 10 dpi, lo que puede estar relacionado con la respuesta inmunitaria contra el PRV. Estudios previos han demostrado que el PRV tiene la carga viral más alta entre 7 y 10 dpi y que la detección de anticuerpos en la respuesta inmune humoral después de la inmunización ocurre después de 5 a 10 dpi (36). Por lo tanto, planteamos la hipótesis de que la administración de RHF y SGP dentro de los 10 ppp posteriores a la infección aumentaría los niveles de factores inmunes relacionados con el PRV en los lechones, promovería la proliferación de linfocitos y mejoraría la resistencia de los lechones al PRV. Nuestros resultados mostraron que RHF y SGP pueden reducir los síntomas clínicos y el daño patológico en lechones infectados con PRV al mejorar su inmunidad.

En este estudio, las pruebas in vitro tuvieron algunas limitaciones y, en el futuro, se pueden aislar células primarias de tejido desafiado y se puede utilizar el análisis transcriptómico para buscar proteínas con diferencias significativas. La validación se realizó en células primarias y la seguridad de estos dos extractos en células necesita más investigación. En el futuro se llevarán a cabo análisis farmacológicos en red del monómero de baicalina y la PRV para encontrar dianas y vías funcionales que proporcionen información para producir fármacos más eficaces y adecuados para el tratamiento de la PRV.

5 Conclusión

Los tratamientos con RHF y SGP alivian los síntomas clínicos de la infección por PRV en lechones. El efecto inmunomodulador del tratamiento con PSG fue mejor que el de la RHF y una combinación de ambos tratamientos. Este estudio tiene implicaciones importantes en la búsqueda de medicamentos herbarios eficaces que puedan controlar la transmisión y la infección por PRV.

Declaración de disponibilidad de datos

Las contribuciones originales presentadas en el estudio se incluyen en el artículo/material complementario, las consultas posteriores pueden dirigirse al autor correspondiente.

Declaración ética

El estudio en animales fue aprobado por el Comité Internacional de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad Agrícola de Yunnan (código de permiso: YAUACUC06; fecha de publicación: 10 de julio de 2017). El estudio se llevó a cabo de acuerdo con la legislación local y los requisitos institucionales.

Contribuciones de los autores

XS: Escritura – revisión y edición. YZ (2º autor): Redacción – borrador original. XZ: Visualización, Escritura – revisión y edición. YZ (4º autor): Metodología, Redacción – revisión y edición. YS: Conceptualización, Escritura – revisión y edición. YW: Curación de datos, redacción, revisión y edición. ZZ: Software, Escritura – revisión y edición. CS: Supervisión, Redacción – revisión y edición.

Financiación

El/los autor/es declaran/n que se recibió apoyo financiero para la investigación, autoría y/o publicación de este artículo. Este estudio contó con el apoyo del Proyecto Nacional de Investigación y Desarrollo «Integración y demostración de la tecnología de cría verde y saludable del cerdo Zhaotong Wugen en el condado de Zhenxiong» (subvención n.º 2022YFD1100407).

Reconocimientos

El artículo fue coescrito por XS, YZ, XZ, YZ, YS, YW y ZZ.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto de intereses.

Nota del editor

Todas las afirmaciones expresadas en este artículo son únicamente las de los autores y no representan necesariamente las de sus organizaciones afiliadas, ni las del editor, los editores y los revisores. Cualquier producto que pueda ser evaluado en este artículo, o afirmación que pueda ser hecha por su fabricante, no está garantizado ni respaldado por el editor.

Referencias