Introducción

Sabiendo que cada procedimiento quirúrgico está causando un trauma de tejido blando, y que el trauma de tejido conduce a una reacción inflamatoria bien orquestada, es de suma importancia comprender la respuesta del cuerpo a las heridas para asegurar la cicatrización adecuada de la herida (1, 2).

La reacción inflamatoria es necesaria para permitir que el cuerpo se adapte al trauma quirúrgico y para promover la curación. Una respuesta inflamatoria exuberante es predictiva de complicaciones. Para evaluar la gravedad de la reacción inflamatoria, varios biomarcadores han demostrado ser útiles en caballos. La reacción sistémica medible se denomina respuesta de fase aguda (APR) (3). La APR sistémica es un conjunto complejo de reacciones inflamatorias inducidas por daño tisular o infección. La APR se inicia por la liberación de varias proteínas de fase aguda (APP) (4). Un grupo importante de APPs son las citocinas, como la interleucina (IL) 1ß, la IL6 y el factor de necrosis tumoral α (TNF-α). Estas citocinas pueden inducir la producción de amiloide A sérico (SAA) en el hígado (5, 6). La haptoglobina y el fibrinógeno también aumentan significativamente después del daño tisular y se clasifican como APR moderada. (7-9).

La APP más utilizada en medicina equina es la SAA (6, 10-12). Su producción es iniciada por IL 1ß e IL 6 en el hígado dentro de las 6 horas posteriores a la lesión, lo que lleva a un aumento de hasta 1.000 veces para defender la inflamación y promover la cicatrización de los tejidos (5, 13). El SAA tiene una vida media corta de 30 a 120 min (14, 15), lo que lo convierte en un valioso monitor del curso de la inflamación. Un aumento pronunciado de la AAS se correlaciona con un mayor riesgo de complicaciones postoperatorias después de la castración de los sementales (3, 6, 16, 17). La castración de sementales es un procedimiento estándar en medicina equina con riesgo de complicaciones postquirúrgicas, como edema, seroma, retraso en la cicatrización de heridas con dehiscencia de suturas e infecciones como principales riesgos de complicaciones (18-21).

Se sabe que los procedimientos quirúrgicos causan un dolor considerable. Por razones de bienestar animal, es obligatorio un control suficiente del dolor postoperatorio (22-24). Los antiinflamatorios no esteroideos (AINE) se utilizan de forma rutinaria por su efecto analgésico y antiinflamatorio. La flunixina-meglumina (Phlogoxin, SelectaVet GmbH, Alemania) es un fármaco de uso frecuente para tratar el dolor visceral leve y reducir la reacción inflamatoria (25). Las guías recientes recomiendan el tratamiento con AINE, por ejemplo Flunixin-Meglumin antes y hasta 3 días después de la cirugía para reducir el dolor postoperatorio y limitar la reacción inflamatoria (26). Se sabe que los AINE son más efectivos como analgésicos, cuando la inflamación es parte del proceso de dolor debido a la regulación a la baja de IL1ß (27, 28). Además de los efectos positivos del inhibidor no selectivo de la ciclooxigenasa (COX), Flunixin-Meglumin también tiene efectos secundarios considerables, como, entre otros, ulceración gastrointestinal y deterioro de la función renal (29).

La flunixina-meglumin inhibe la síntesis de prostanoides como la prostaglandina-E2 (PGE2), las prostaciclinas y los tromboxanos mediante el bloqueo de las enzimas ciclooxigenasa 1 (COX-1) y ciclooxigenasa 2 (COX-2) (28). Por el contrario, se ha demostrado que Traumeel (registrado para uso humano, Heel GmbH, Alemania) regula varias vías asociadas con la resolución de la inflamación aguda, incluida la apoptosis, la migración de leucocitos y la angiogénesis en un modelo murino de cicatrización de heridas (2, 30). Traumeel tiene un impacto positivo en la síntesis de mediadores pro-resolutivos (SPM) especializados en macrófagos derivados de monocitos humanos y, por lo tanto, Traumeel está mejorando la eferocitosis de neutrófilos por macrófagos y la producción de SPM en un modelo de ratón inducido por zimosano (31). En ensayos controlados aleatorizados doble ciego previos, se ha demostrado que Traumeel reduce el dolor, uno de los sellos distintivos de la inflamación aguda, después de una lesión musculoesquelética en pacientes humanos (32, 33). Además, Traumeel inhibe la producción de IL1ß y TNF-α mediante el reposo y la activación de células inmunitarias in vitro (2).

El presente ensayo clínico prospectivo, doble ciego y aleatorizado obtuvo datos sobre los síntomas inflamatorios clínicos perioperatorios (temperatura corporal interna, evaluación de la herida), el dolor (puntuación frecuente del dolor) y los cambios en los marcadores sanguíneos que reflejan la APR y la reacción de estrés relacionada con el dolor (AAA, fibrinógeno, hierro, glóbulos blancos (WBC), neutrófilos, IL1 y cortisol).

El objetivo de nuestro estudio fue evaluar de forma objetiva la respuesta inflamatoria perioperatoria tras la castración de sementales comparando Traumeel LT ad us. veterinario. al medicamento antiinflamatorio no esteroideo Flunixin-Meglumin, con la hipótesis de que Traumeel LT nos adquiere nosotros. veterinario. reduciría los valores de SAA comparables a los de Flunixin-Meglumin y Traumeel LT ad us. veterinario. reduciría las complicaciones de la cicatrización de heridas.

Materiales y métodos

Este estudio clínico prospectivo, doble ciego, aleatorizado fue aprobado por el comité ético del consejo regional de Giessen en Hessen (Alemania) con el número G 94/2019. Los propietarios dieron su consentimiento informado por escrito para la inclusión de sus sementales en el estudio.

Animales

Se reclutaron un total de 60 sementales para el estudio entre marzo de 2020 y septiembre de 2021. Los criterios de inclusión para el estudio se cumplieron en 57 sementales clínicamente sanos. Los criterios de inclusión fueron ausencia de tratamiento con AINE o medicamentos biorreguladores en las 4 semanas previas, un examen clínico sin importancia, testículos en el escroto al menos bajo sedación, un AAS sérico <45 mg/mL, y hematología y química clínica dentro de los límites normales. Se excluyeron los sementales con enfermedad renal aguda o crónica diagnosticada, antecedentes de gastritis y/o úlceras gástricas o vacunación en los últimos 10 días. Los 57 sementales fueron aleatorizados mediante una aleatorización de parejas emparejadas. Se realizó una aleatorización para los parámetros edad, peso y AAS basal. La aleatorización de parejas emparejadas fue realizada por veterinarios que no trabajaban ni estaban conectados con la clínica de caballos. De los 57 sementales, 54 sementales tenían coincidencia y, por lo tanto, se incluyeron en el estudio, dejando 27 sementales por grupo.

Un día después de la llegada, se colocó un catéter permanente en una vena yugular externa en todos los caballos y se tomaron muestras de sangre para hematología y química clínica, incluida la AAS.

Tratamiento

Los fármacos fueron preparados por los veterinarios responsables de la aleatorización de las parejas emparejadas. Los fármacos se entregaron a la clínica en jeringas opacas para asegurar el cegamiento (Figura suplementaria S1). Debido a las diferentes vías de aplicación, ya sea intravenosa o subcutánea y a los puntos temporales, los caballos de ambos grupos recibieron una dosis de suero y un placebo (NaCl 0,9%) en los momentos indicados.

Los caballos del grupo Flunixin fueron tratados con Flunixin-Meglumin (Phlogoxin, SelectaVet GmbH) con 1,1 mg/kg de peso corporal i.v. cada 24 h, tal y como se recomienda en el prospecto. La medicación se administró en tres momentos. La primera dosis se administró aproximadamente 15 min antes de la anestesia, luego 24 y 48 h después de la castración. En este grupo, cada caballo recibió NaCl 0,9% por vía subcutánea como placebo para asegurar el cegamiento del estudio.

Los caballos del grupo Traumeel (TR) recibieron Traumeel LT por nuestra parte. veterinario. (registrado para uso veterinario, Heel GmbH, Alemania) como inyecciones subcutáneas en una solución acuosa. Los caballos que pesaron <500 kg de peso corporal recibieron 5 mL y los caballos ≥500 kg de peso corporal recibieron 10 mL, según lo recomendado por el fabricante. Una ampolla de 5 mL contiene los siguientes ingredientes: Aconitum napellus Dil. D4, 300 mg; Árnica montana Dil. D4, 500 mg, Atropa bella-donna Dil. D4, 500 mg; Bellis perennis Dil. D4, 250 mg; Caléndula officinalis Dil. D4, 500 mg; Matricaria recutita Dil. D5, 500 mg; Equinácea Dil. D4, 125 mg; Echinacea purpurea e planta tota Dil. D4, 125 mg; Hamamelis virginiana Dil. D4, 50 mg; Hypericum perforatum Dil. D4, 150 mg; Achillea millefolium Dil. D5, 500 mg; Symphytum officinale Dil. D8, 500 mg; Hepar sulfuris Dil. D6 aquos., 500 mg; Mercurius solubilis Hahnemanni Dil. D8, 250 mg. La primera dosis se administró aproximadamente 15 min antes de la anestesia, luego el grupo TR recibió Traumeel LT ad us. veterinario. Cada 12 h hasta 48 h después de la castración. En este grupo, cada caballo recibió NaCl i.v. como placebo para asegurar el cegamiento del estudio.

Se eligió el butorfanol (Butorgesic 10 mg/mL, CP-Pharma, Burgdorf) como analgésico de rescate porque puede combinarse de forma segura con Flunixin-Meglumin y Traumeel LT ad us. veterinario. por lo tanto, no rompió el cegamiento si se tenía que administrar Butorfanol. Se permitió la administración de butorfanol dos veces cada 6 h si la escala de muecas del caballo era de >4 y/o la escala compuesta del dolor era de >12.

Castración

Todos los sementales fueron castrados bajo anestesia general en decúbito dorsal con anestesia local adicional infiltrada en el testículo hacia el cordón espermático.

La comida se retuvo durante 4-6 horas, pero los caballos tuvieron acceso al agua hasta que fueron premedicados. La premedicación se administró aproximadamente 15 minutos antes de la sedación con una combinación de un agonista α2 (xilacina: 0,8 mg/kg de peso corporal i.v., Xylavet® 20 mg/mL, CP-Pharma, Burgdorf, Alemania) y un opioide (Butorfanol: 0,05 μg/kg de peso corporal i.v., Butorgesic® 10 mg/mL, CP-Pharma, Burgdorf, Alemania).

La anestesia general se indujo con ketamina 2,5 mg/kg de peso corporal por vía intravenosa (Anesketin, 100 mg/mL, Dechra Veterinary Products Deutschland GmbH, Aulendorf, Alemania) y diazepam 0,05 mg/kg de peso corporal por vía intravenosa (Ziapam® 5 mg/mL, Dechra Veterinary Products Deutschland GmbH, Aulendorf, Alemania).

Después de la intubación orotraqueal y el posicionamiento en decúbito dorsal, la anestesia se mantuvo con un protocolo balanceado con isoflurano (Isofluran CP® 1 mL/mL; CP-Pharma, Burgdorf, Alemania) en infusión de oxígeno al 100% y goteo continuo con xilacina (0,3-0,8 mg/kg por hora i.v.) ajustada para mantener una profundidad de anestesia en estadio III, plano 2. Los parámetros respiratorios y cardiovasculares, así como la presión arterial y la saturación de oxígeno se monitorizaron durante todo el procedimiento quirúrgico. La gasometría arterial (Cobas b® 123, Roche Diagnostics, Mannheim, Alemania) se realizó cada 20 min durante la anestesia. Todos los caballos recibieron la solución de Ringer (5-10 mL/kg por hora i.v.) para el suministro de líquidos y electrolitos. Se infundió dobutamina a una tasa de 0,25-1 μg/kg por min i.v. para mantener la MAP (presión arterial media) > 60 mmHg.

Dos cirujanos experimentados realizaron la castración siguiendo el mismo procedimiento quirúrgico estándar. Después de la preparación aséptica del campo quirúrgico, se inyectó lidocaína (clorhidrato de limoceno al 2%, 20 mg/mL, Bela-pharm GmbH & Co. KG, Alemania) a una dosis de 0,4 mg/kg de peso corporal intratesticular a cada testículo (esta dosis corresponde a 10 ml por testículo en un caballo de 500 kg) (34). Después de la inyección de lidocaína, se realizaron dos incisiones cutáneas con una longitud aproximada de 7 cm sobre el anillo inguinal superficial. Se incidió la fascia subyacente y se preparó el tejido romo hasta que los testículos de la túnica vaginal quedaron expuestos. Después de diseccionar el músculo cremaster con la ligasura™, se trituró el cordón espermático con el emasculador de Sand y se realizó una doble ligadura alrededor del cordón espermático (Safil®, USP 1, B. Braun Surgical, S.A. Rubi, España). Después de la inspección de la hemorragia, se liberó el pedículo y se cerró la herida en dos capas con una sutura monofilamento USP 2–0 reabsorbible utilizando una sutura de colchón horizontal para la fascia (Biosyn™, Covidien, Neustadt/Donau, Alemania) y una sutura de colchón horizontal para la incisión intradérmica y cutánea (Novosyn®, USP 2–0, B. Braun Surgical, S.A. Rubi, España). Todos los caballos recibieron alimento blando alrededor de 3 h después de la recuperación y heno normal después.

Cuidados postoperatorios

Los cuidados postoperatorios incluyeron examen físico, puntuación del dolor y evaluaciones de la herida. El día de la castración, los caballos fueron monitoreados intensivamente cada 4 h (4, 8 y 12 h después de la cirugía). Los exámenes posteriores se realizaron a las 24, 36, 48 y 72 h después de la castración.

Para la evaluación de la herida, la hinchazón incisional, la adaptación de la sutura y la secreción de la herida se puntuaron para cada sutura por separado. La hinchazón incisional se clasificó como sin hinchazón, leve (<0,5 cm de diámetro), moderada (≥0,5-2 cm de diámetro), grave (>2-5 cm de diámetro) o intensa (>5 cm de diámetro). La dehiscencia de la sutura se clasificó como sin dehiscencia, leve (hasta 25%), moderada (25-50%), grave (>50-75%) o dehiscencia completa de la sutura. La secreción se describió como serosa, sanguinaria o purulenta.

La primera evaluación del dolor se realizó el día antes de la castración para establecer el valor basal individual. Para la puntuación, se utilizó una Escala Compuesta de Dolor (CPS) modificada (35) (Tabla Suplementaria S2a) y la Escala de Muecas de Caballo (HGS) (Tabla Suplementaria S2b) (36). Para realizar la puntuación de dolor, el examinador ciego inicialmente se paró frente al establo de los caballos sin contactarlos. Después de puntuar el comportamiento y la expresión visual, se estableció contacto con el semental y se realizó el examen físico, incluido el registro de datos fisiológicos para el CPS modificado.

Los caballos recibían butorfanol como analgésico de rescate cuando el CPS o el HGS alcanzaban un nivel moderado de dolor. La puntuación de dolor moderado se definió como un tercio de la puntuación total de CPS o HGS. Todos los caballos con un CPS modificado >12/36 o HGS >4/12 fueron elegibles para el medicamento de rescate butorfanol (Butorgesic® 10 mg/mL, CP-Pharma, Burgdorf, Alemania) 0,1 mg/kg de peso corporal i.v. Si un semental con evidencia de dolor continuaba excediendo el límite de CPS o HGS después de dos aplicaciones consecutivas de butorfanol, u otra condición para el dolor se hizo clínicamente evidente, el estudio tuvo que suspenderse con la ruptura del cegamiento para estos pacientes y se implementó un tratamiento adaptado a la condición. Los caballos sin complicaciones postoperatorias fueron dados de alta a los 3 días de la cirugía. Se aconsejó reposo en caja y caminar con las manos durante las siguientes 2 semanas (20-60 min/día). A continuación, se permitió que los caballos volvieran a su nivel normal de actividad.

Extracción y preparación de sangre

Se recogieron veinte ml de sangre de la cánula venosa permanente en la vena yugular el día antes de la cirugía, 24 h, 48 h y 72 h después de la cirugía. Antes de la toma de muestras de sangre, se descartaron 10 mL de sangre. La sangre se almacenó en tubos de plasma de EDTA (K3 EDTA, Sarstedt, Nuembrecht, Alemania) para hematología, tubos de plasma de heparina (heparina de litio, Sarstedt, Nuembrecht, Alemania) para el examen químico clínico, mediciones de cortisol e IL1ß, tubos de plasma de citrato (Citrato 3,2%, Sarstedt, Nuembrecht, Alemania) para la medición de fibrinógeno y el suero se recolectó en tubos con un activador de la coagulación (tubo de suero, Sarstedt, Nuembrecht, Alemania) para la determinación de SAA. Para el almacenamiento, se obtuvieron 3 mL de suero y 2 mL de plasma de heparina en cada punto de tiempo por centrifugación y se congelaron a -80 °C.

Laboratorio

La hematología completa se realizó con el ADVIA 2120 (Siemens Healthcare GmbH, Erlangen, Alemania) o el ProCyte Dx™ (IDEXX, Westbrook, Estados Unidos). Ambos analizadores han sido validados previamente para especímenes equinos y mostraron una excelente concordancia (37).

Las pruebas de química clínica con el ABX Pentra C400 (Horiba Diagnostics, Francia) incluyeron urea, creatinina, sodio, cloruro, potasio, calcio, fosfato, magnesio, proteínas totales, albúmina, globulina, bilirrubina total, fosfatasa alcalina (AP), glutamato deshidrogenasa (GLDH), gamma-glutamil transpeptidasa (GGT), aspartato aminotransferasa (AST), creatina quinasa (CK), lactato deshidrogenasa (LDH) y hierro.

El fibrinógeno plasmático se midió en el STA Compact Max3 (Diagnostica Stago S.A.S., Francia) y las concentraciones séricas de SAA se determinaron con el método inmunoturbidométrico (LZ test SAA, Eiken Chemical, Tokio, Japón) ejecutado en el analizador Pentra C400.

El cortisol y la IL1ß se analizaron en un laboratorio externo (Laboklin, Bad Kissingen, Alemania). Las muestras se enviaron congeladas. El cortisol se midió por duplicado con un ensayo de quimioluminiscencia, validado para muestras de equinos, en un sistema Immulite 2000 XPi (Siemens Healthcare GmbH, Erlangen, Alemania). La interleucina equina 1ß se midió por duplicado con un inmunoensayo enzimático sándwich específico para muestras equinas según el protocolo del fabricante y la absorbancia se midió con un lector de 96 placas a una longitud de onda de 450 nm (Reddot Biotech, Kelowna, Canadá).

Estadística

Los métodos estadísticos estándar se emplearon utilizando el software JMP (JMP Statistical Discovery LLC, Cary, Estados Unidos). Antes del análisis, se comprobó el conjunto de datos en busca de valores atípicos y de distribución normal. El número de sementales por grupo se calculó para alcanzar una potencia de 0,8 calculada para la variable principal SAA sérica asumiendo una reducción de SAA sérica por Traumeel LT ad us. veterinario. y Flunixin-Meglumin en comparación con un estudio previo (13). El número calculado fue de 25 sementales por grupo. Para corregir los caballos potencialmente inigualables, el estudio se centró en 60 caballos. También se realizó un análisis de potencia retrospectiva que mostró que, para una reducción de la variable principal SAA sérica, se alcanzó una potencia de >0,8. Se calcularon los datos basales para la población con intención de tratar (n = 57). Toda la evaluación estadística posterior se realizó con la población por protocolo (PP) (n = 49; Grupo TR: n = 24; Grupo FL: n = 25). Los datos basales se compararon entre los grupos utilizando la prueba de rangos con signo de Wilcoxon para los datos de intervalos. La prueba de rangos con signo de Wilcoxon se utilizó para probar datos de pares emparejados para una mediana común, asumiendo que la población es simétrica. Se utilizó la prueba de Mantel-Haenszel para los datos ordinales, cuando fue apropiado. Para la comparación entre tratamientos, se calcularon los cambios desde el inicio y las diferencias entre los grupos. Se realizaron comparaciones estadísticas con ANOVA de medidas repetidas para analizar las diferencias entre medias, y se utilizó la prueba de Mantel-Haenszel para datos categoriales estratificados o pareados. Se utilizó la prueba no paramétrica de McNemar para analizar los datos nominales pareados. Para las variables dependientes, se utilizó la prueba t pareada. Para todas las comparaciones, se calcularon límites de confianza del 95% bilaterales.

Se consideró estadísticamente significativo un valor de p <0,05. Para las variables distribuidas casi normales, la descripción de los datos se dio por media aritmética y desviación estándar. La representación gráfica de los datos se dio mediante diagramas de caja y bigotes que mostraron el primer (25%), la mediana (50%) y el tercer cuartil (75%). Los bigotes muestran valores dentro de 1,5 veces el rango intercuartílico (IQR). Los valores atípicos se muestran por separado y se trazan como puntos individuales.

Resultados

Se reclutaron sesenta sementales para el estudio, 57 sementales cumplieron con todos los criterios de inclusión y no tenían criterios de exclusión. De estos 57 sementales, 3 sementales no tuvieron coincidencia en la aleatorización de parejas emparejadas y tuvieron que ser excluidos del análisis, quedando 54 sementales en el estudio con 27 sementales en el grupo FL y 27 sementales en el grupo TR (Figura 1). Todos los sementales incluidos (n = 54/60, ITT) tenían un peso corporal medio de 467 +/− 120,3 kg (DE) y una edad media de 3,5 +/− 1,8 años (DE). Las estadísticas descriptivas de los resultados del examen inicial se resumen en la Tabla 1. No hubo diferencia estadísticamente significativa entre los grupos para estos parámetros (Tabla 1).

Figura 1. Reclutamiento de sementales.

De los 57 sementales inscritos en el estudio, cinco caballos tuvieron que ser excluidos durante el estudio. Uno de los cinco caballos tuvo una reacción alérgica después de recibir el agonista α2 y Flunixin-Meglumin como premedicación y recibió un glucocorticoide (dexametasona 0,08 mg/kg de peso corporal i.v., solución inyectable de dexametasona 2 mg/mL, CP-Pharma, Burgdorf, Alemania). Se observó que otros cuatro sementales tenían fiebre superior a 39,5 °C 36 h después de la castración y se les examinó más a fondo con ecografía del abdomen y se trataron con antibióticos y otros AINE. De estos cinco caballos excluidos durante el período de estudio, dos estaban en el grupo FL y tres en el grupo TR. Esta diferencia no fue estadísticamente significativa (p = 0,46). Para un análisis estadístico posterior se utilizó la población PP (n = 49).

La proteína mayor de la fase aguda SAA aumentó significativamente en 24 h y 48 h en ambos grupos y disminuyó en el punto temporal de 72 h (24 h: TR: p = 0,0001, FL: p = 0,0012; 48 h: TR: p = 0,006, FL: p = 0,0092; 72 h: TR: p = 0,006, FL: p = 0,0002; Figura 2). A las 24 h los valores de SAA difirieron significativamente comparando el grupo FL y el TR (p = 0,03). No hubo diferencia significativa entre los grupos en ningún otro momento (0 h: p = 0,80, 48 h: p = 0,08 72 h: p = 0,09). El valor medio más alto de SAA se alcanzó a las 48 h (TR: 226 μg/mL, FL: 122 μg/mL). A partir de entonces, el AAS disminuyó (Figura 2). Después de la cirugía, los APRs moderados de glóbulos blancos y neutrófilos mostraron un aumento inducido por la cirugía y volviendo al valor basal en 72 h (Figuras 3A,B). No hubo diferencias significativas entre el grupo TR y FL. El fibrinógeno aumentó leve pero significativamente a las 24 h y a las 48 h, pasando de un valor basal de 2,1 a 2,8 g/L a las 72 h sin superar el rango de referencia. No hubo diferencia significativa entre ambos grupos en ningún momento (0 h: p = 0,97, 24 h: p = 0,23, 48 h: p = 0,11, 72 h: p = 0,17; Figura 3C). Como parte de la reacción inflamatoria, el hierro disminuyó significativamente dentro de las 24 h después de la cirugía de 23,5 μg/dL al inicio a 11,9 μg/dL a las 24 h (p < 0,001; Figura 3D). Ambos grupos no difirieron significativamente en ningún momento (0 h: p = 0,11, 24 h: p = 0,25; 48 h: p = 0,29; 72 h: p = 0,34).

A pesar de las medidas de reducción del dolor, la cirugía provocó un aumento significativo de la puntuación del dolor en ambos grupos, alcanzando los valores más altos a las 8 h después de la cirugía, volviendo a los valores basales a las 48 h en el grupo TR y a las 72 h en el grupo FL (Figura 4). No hubo diferencias significativas en ningún momento entre los grupos de tratamiento para el HGS. No se pudo calcular un valor p para el punto temporal de 0 h y 72 h porque la media de ambos grupos fue cero (4 h: TR: p = 0,31, 8 h: p = 0,8, 12 h: p = 0,21, 24 h: p = 0,19, 36 h: p = 0,16, 48 h: p = 1,0). Además, no se observaron diferencias estadísticamente significativas en el CPS modificado comparando ambos grupos (antes de la cirugía: p = 0,42, 4 h: p = 0,2, 8 h: p = 0,13, 12 h: p = 0,41, 24 h: p = 0,34, 36 h: p = 0,76, 48 h: p = 0,29, 72 h p = 0,63). Para una mejor visibilidad, se calculó una puntuación de resumen del dolor sumando ambas puntuaciones de dolor (Figura 4). De acuerdo con las puntuaciones de dolor único, no hubo diferencias significativas en ningún momento en la puntuación resumida del dolor en comparación con el grupo TR y FL (antes de la cirugía: p = 0,37, 4 h: p = 0,79, 8 h: p = 0,06, 12 h: p = 0,1, 24 h: p = 0,63, 36 h: p = 0,94, 48 h: p = 0,4, 72 h p = 0,63). Curiosamente, hubo una correlación de regular a buena (r²: 0,56-0,83) de ambas puntuaciones en todos los puntos temporales, excepto en el punto de tiempo de 0 h y 72 h. Ningún caballo incluido en el estudio necesitó el medicamento de rescate butorfanol en ningún momento. La IL 1ß, mediadora del dolor, se incrementó ligeramente sin alcanzar significación. No hubo diferencia significativa en el grupo TR y en el grupo FL, comparando la concentración media de IL 1ß (0 h: p = 0,39, 24 h: p = 0,41, 48 h: p = 0,34, 72 h: p = 0,33). Un caballo del grupo FL mostró valores altos de IL 1ß antes y durante el estudio. Por lo tanto, también se calculó IL 1ß, excluyendo el valor atípico del análisis y no se observó diferencia significativa entre ambos grupos (0 h: p = 0,77, 24 h: p = 0,70, 48 h: p = 0,87, 72 h: p = 0,90). El cortisol es un marcador validado del dolor en los caballos. No hubo diferencia significativa del cortisol plasmático al comparar el TR y el grupo FL en ningún momento (0 h: p = 0,75, 24 h: p = 0,05, 48 h: p = 0,42, 72 h: p = 0,64; Figura 4).

Figura 4. Evaluación del dolor en sementales después de la castración. (A) Resumen de la puntuación del dolor. b) Cortisol plasmático. Los datos (n = 54) se muestran como diagramas de caja que muestran el primer (25%), la mediana (50%) y el tercer cuartil (75%). Los bigotes muestran valores dentro de 1,5 veces el rango intercuartílico (IQR). Los valores atípicos se muestran por separado y se trazan como puntos individuales. * Indica diferencia significativa entre grupos (p < 0,05). Grupo Traumeel (n = 24), grupo Flunixin (n = 25).

La anestesia tiene un impacto en la perfusión general y la oxigenación de los tejidos, y esto puede influir en la cicatrización de los tejidos (38, 39). La duración media de la anestesia fue de 50 min (rango: 35-70 min) y no hubo diferencia estadísticamente significativa de la duración de la anestesia en ambos grupos (TR: media = 52 min, FL: media = 49 min, p = 0,23). La xilacina se administró en forma de infusión continua por goteo como parte del protocolo de anestesia equilibrada. La dosis total de xilacina no fue estadísticamente diferente en ambos grupos (dosis total de xilacina: TR: media = 300,17 mg por anestesia, FL: media = 271,06 mg por anestesia, p = 0,27), además la dosis de xilacina por peso corporal y tiempo no fue significativamente diferente entre los grupos (TR: media = 0,75 mg/kg por hora, FL: 0,73 mg/kg por hora, p = 0,53). Durante la anestesia, los caballos recibieron dobutamina a dosis bajas para mantener una PAM entre 60 y 120 mmHg. Se administró dobutamina en un grupo de 0,2-1 μg/kg por minuto (media: grupo TR: 0,49 μg/kg por min, FL 0,57 μg/kg por min; p = 0,34). La PAM media en los sementales estuvo entre MAPmin de 60 mmHg y MAPmáx de 118 mmHg (MAPmin media: TR: 80,2 mmHg; FL: 77,5 mmHg, p = 0,40 y MAPmax medio: TR: 94,1 mmHg; FL: 95,3 mmHg, p = 0,74).

En general, el 12,24% (n = 6/49) de los sementales presentaron una dehiscencia de sutura de diversos grados. La dehiscencia de la sutura ocurrió 8 h después de la cirugía en un semental, y 24 h o 36 h después de la cirugía en dos y tres sementales, respectivamente. La dehiscencia de la sutura se puntuó como leve en 4/6 sementales y moderada en dos sementales. En el grupo FL, 5 sementales desarrollaron una dehiscencia de sutura en comparación con solo un semental en el grupo TR (p = 0,001; Figura 5).

Figura 5. Cicatrización de heridas. (A,B) La sutura del espacio inguinal izquierdo sin signos de complicaciones en la cicatrización de la herida, 24 h después de la castración. (A) Caballo tratado con Traumeel LT ad us. veterinario. (B) Caballo tratado con Flunixin-Meglumin. (C) Edema leve de la sutura (semental tratado con Flunixin-Meglumin) 24 h después de la castración. (D,E) dehiscencia de la sutura en un semental tratado con Flunixin-Meglumin. (D) 24 h después de la castración y E. 72 h después de la castración.

En el grupo FL, la creatinina aumentó después de la cirugía y fue significativamente mayor en comparación con el grupo TR en todos los puntos temporales después de la cirugía (0 h: p = 0,14, 24 h: p = 0,019, 48 h: p = 0,0002, 72 h: p = 0,0049; Figura 6). En 2/27 caballos del grupo FL, la concentración plasmática de creatinina superó ligeramente el intervalo de referencia superior 48 h después de la cirugía (162-173,6 μmoL/L, intervalo de referencia: 77-160 μmoL/L). No hubo correlación entre la creatinina y la edad en este estudio (r² = 0,001; p = 0,8; Figura 6).

Figura 6. Creatinina plasmática (μmol/l). Los datos (n = 49) se muestran como diagramas de caja que muestran el primer (25%), la mediana (50%) y el tercer cuartil (75%). Los bigotes muestran valores dentro de 1,5 veces el rango intercuartílico (IQR). Los valores atípicos se muestran por separado y se trazan como puntos individuales. * Indica diferencia significativa entre grupos (p < 0,05). Grupo Traumeel (n = 24), grupo Flunixin (n = 25)1: p < 0,0001, 2: p = 0,016, 3: p = 0,019, 4: p = 0,0002, 5: p = 0,0049.

Efectos secundarios

Traumeel LT ad us. veterinario. fue bien tolerado por todos los sementales. Se monitorizaron las reacciones locales en los sitios de inyección subcutánea y 4/27 sementales del grupo FL que recibieron NaCl s.c. como placebo y 2/27 sementales del grupo TR desarrollaron una ligera hinchazón que se resolvió un día después de la inyección. No se registraron efectos secundarios causados por el catéter yugular permanente.

Discusión

El estudio mostró una reducción de la APR en ambos grupos de tratamiento después de la castración en comparación con los sementales que recibieron Flunixin-Meglumin una vez antes de la cirugía (13). La APR postoperatoria ha sido de gran interés en las últimas dos décadas en medicina y cirugía equina, mostrando un impacto pronóstico para las complicaciones postoperatorias (6, 13, 40) La APR se puede caracterizar por temperatura corporal, leucocitos, neutrófilos, fibrinógeno, hierro y AAS. La SAA es la APP más importante, con una vida media corta de 30 a 120 min, lo que explica un aumento rápido con una caída de SAA en 12 h si la inflamación se resuelve, lo que la convierte en un buen monitor de la respuesta al tratamiento (20, 41).

En nuestro estudio, el daño tisular causado por la castración indujo una reacción inflamatoria medible en ambos grupos de tratamiento. Estudios previos con técnicas de castración comparables y ensayos de AAS midieron valores medios máximos de AAA de hasta 400-600 μg/mL a las 72 h (6, 13). La amplitud y la duración del aumento de la AAS en nuestro estudio fueron menores, con valores medios máximos de SAA de hasta 176,4 μg/mL a las 48 h en comparación con estudios previos (6, 13). El aumento de SAA depende sin duda de la técnica de castración utilizada, con la castración en pie en el establo que muestra los valores más altos (16) y la castración cerrada en un entorno clínico que tiene las concentraciones más bajas de SAA (13). Tomando los datos de estudios comparables, la duración y amplitud de la concentración de SAA en este estudio parece reducida. Por ejemplo, el estudio de Miller et al. utilizó la misma técnica de castración y el mismo ensayo de SAA, pero Flunixin-Meglumin y antibióticos se administraron solo una vez antes de la cirugía. En nuestro estudio, se administró flunixin-meglumina tres veces y no se administró ningún antibiótico. Las diferencias en la pauta de dosificación pueden explicar la reducción de la TAE en el estudio que aquí se presenta.

La SAA no solo está influenciada por la técnica de castración. Los antibióticos administrados antes de la operación pueden disminuir la AAS al reducir la reacción inflamatoria (16) y, en consecuencia, disminuir el riesgo de complicaciones (42). Reducir el uso de antibióticos, especialmente en un entorno profiláctico antes de la cirugía, es de suma importancia para reducir la formación de bacterias multirresistentes (43).

En nuestro estudio, se observó un aumento de la temperatura, como una complicación, en el 7,4% de los sementales. La temperatura febril ha sido evaluada en un estudio previo, alcanzando el 2,5% en sementales con cierre de herida primaria que recibieron penicilina antes de la operación (44). Estos resultados muestran que los antibióticos pueden evitarse en un entorno clínico con una preparación quirúrgica estéril, un seguimiento estrecho de los caballos y si se trata de antibióticos. veterinario. o Flunixin-Meglumin se administran antes y después de la operación para evitar complicaciones al reducir la APR después de la cirugía.

La flunixina-megluina es un conocido y potente fármaco antiinflamatorio que reduce la SAA al inhibir la COX-1 y la COX-2 y, por lo tanto, reducir la APR después de la castración del semental (25). El efecto más fuerte de Flunixin-Meglumin sobre el AAS después de la cirugía se ha observado si Flunixin-Meglumin se administra por vía intravenosa antes y durante 48-72 h después de la operación (25). El efecto fue menos pronunciado si Flunixin-Meglumin solo se administró una vez antes de la cirugía (13) y esto podría explicar la activación comparativamente reducida de la APR observada en este estudio.

Se sabe que Traumeel induce activamente la resolución de la inflamación a través de la regulación a la baja de IL1ß y mediadores proresolutivos específicos (SPM) (31). Traumeel también está desplazando las citocinas proinflamatorias prostaglandina y leucotrieno hacia la prostaciclina y la lipoxina del mediador proresolutivo, induciendo así el cambio de macrófagos proinflamatorios a macrófagos eferocíticos. Este modo de acción de Traumeel podría explicar la reducción de la TAE observada en este estudio (Figura 7). La diferencia significativa en el punto de tiempo de 24 h puede explicarse por el diferente modo de acción de Traumeel y Flunixin-Meglumin. Después de la resolución de la inflamación, se puede iniciar la reparación de los tejidos, lo que permite un inicio más rápido de la cicatrización de la herida (31). Traumeel también tiene un impacto positivo en la cicatrización de heridas al regular más de 100 transcripciones de ARNm relacionadas con vías clave de reparación de heridas, como la respuesta a las heridas, la contracción de la herida y la respuesta de citocinas en un modelo de ratón (2, 30), este modo de acción podría explicar la reducción del número de sementales con dehiscencia de sutura en el grupo TR en comparación con el grupo FL (Figura 7).

Figura 7. Las vías implicadas en la AAS aumentan después de la cirugía.

En un estudio anterior, Traumeel redujo significativamente la citoquina proinflamatoria IL1ß. Se considera que la IL1ß es responsable del dolor inducido por la inflamación (2), además la flunixina-meglumin puede inhibir eficazmente citoquinas proinflamatorias como la IL1ß (45), en concordancia con estos hallazgos previos. veterinario. y Flunixin-Meglumin pareció regular a la baja la IL1ß de manera eficiente.

En concordancia con los valores reducidos de SAA, Traumeel LT nos ad. veterinario. también parece tener una influencia sobre los leucocitos, los neutrófilos, el fibrinógeno y el hierro. Por ejemplo, el fibrinógeno demuestra una respuesta más gradual y persistente en comparación con el SAA, con al menos el doble de valores después de la castración. El fibrinógeno no superó el rango normal y los valores ni siquiera se duplicaron en ese tiempo en nuestro estudio, como se observó en otros estudios (6, 8). Además, la amplitud y la duración de todos los demás parámetros inflamatorios leves y moderados medidos fueron indicativos de una APR leve después de la castración en este estudio.

Cada procedimiento quirúrgico que causa una interrupción de la homeostasis del tejido local está causando dolor. Se han tomado múltiples medidas para reducir el dolor en este estudio. En primer lugar, la técnica de castración utilizada, en segundo lugar el anestésico local inyectado en los cordones testículos y espermáticos y en tercer lugar el tratamiento con Flunixin-Meglumin o Traumeel LT y nosotros. veterinario.. La Escala Compuesta de Dolor y la Escala de Mueca de Caballo son escalas de dolor validadas, fiables y reproducibles (23, 24, 36). Las puntuaciones de dolor solo alcanzaron valores indicativos de dolor leve a moderado, y el butorfanol como medicación de rescate no fue necesario en ningún momento. En el primer momento (4 h) después de la cirugía, el dolor podría haber sido influenciado por la xilazina, un potente analgésico. La dosis de xilacina fue la misma en ambos grupos, asumiendo que el efecto fue similar en ambos grupos. La evaluación subjetiva del dolor fue respaldada por las mediciones de cortisol en plasma. El cortisol se ha evaluado en caballos como un buen marcador del dolor postoperatorio (46, 47). El cortisol aumentó justo antes de la cirugía con valores decrecientes dentro del tiempo de observación de 72 h. El cortisol también es un marcador bien conocido para la inducción del eje de tensión por factores estresantes como el transporte y la manipulación (48-50). El aumento de cortisol antes de la cirugía puede ser un estrés inducido por el transporte y la manipulación. Después de un procedimiento quirúrgico, el eje de estrés puede ser activado por el dolor causando un aumento del cortisol plasmático. No hubo diferencias estadísticamente significativas al comparar el grupo de FL y TR en ningún momento para el HGS, el CPS modificado y el cortisol plasmático, lo que indica que el dolor se controló bien en este estudio en ninguno de los brazos de tratamiento. De acuerdo con nuestros resultados, se ha demostrado que la flunixina-meglumin reduce eficazmente la respuesta de la APR después de la castración y controla eficazmente el dolor en caballos (28, 51-54).

En los caballos, el tracto gastrointestinal (GI) y los riñones se consideran los órganos más afectados por los efectos secundarios de los AINE (29, 55). El mecanismo de acción de los AINE implica la inhibición de COX1/COX2. Estas enzimas son responsables de sintetizar prostanoides, que son importantes para prevenir la enfermedad del tracto gastrointestinal y regular el flujo sanguíneo renal para corregir la hipovolemia (53, 56, 57). En nuestro estudio, se excluyeron los sementales con enfermedad del tracto gastrointestinal conocida o sospechada o enfermedad renal conocida para evitar complicaciones. Sin embargo, en el grupo FL, la creatinina aumentó significativamente 24 h después de la cirugía y aumentó significativamente en comparación con el grupo TR, mostrando los diferentes modos de acción de ambos grupos de tratamiento.

Las principales limitaciones del estudio fueron, en primer lugar, que no se incluyó ningún grupo placebo por razones de bienestar animal. En segundo lugar, el protocolo de anestesia controló la PAM pero no la xilacina y la dobutamina, lo que podría haber influido en la perfusión tisular (38). Además, un período de observación más largo habría sido de interés para monitorear el tiempo desde la regulación positiva de SAA hasta alcanzar los valores basales y evaluar el tiempo total necesario para la cicatrización de la herida. En este entorno clínico, los sementales tuvieron que ser dados de alta de la clínica después de 72 horas después de la cirugía, lo que hizo inviable un tiempo de observación más prolongado. Medir las SPM en el tejido herido habría sido interesante, pero tomar biopsias en el área lesionada habría limitado el número de propietarios dispuestos a participar en el estudio.

Dentro de las limitaciones de este estudio, Traumeel LT nos ad. veterinario. parece tener efectos resolutivos después de la castración del semental, lo que lo convierte en un tratamiento valioso para reducir la APR inducida por la castración y, por lo tanto, reducir las complicaciones posquirúrgicas. Debido a su diferente modo de acción, Traumeel LT nos anuncia. veterinario. podría ser una opción de tratamiento alternativa si se deben evitar los efectos secundarios gastrointestinales o renales de los AINE. Es necesario un estudio adicional para aclarar si una combinación de Traumeel LT nos adquiere. veterinario. y Flunixin-Meglumin en el preoperatorio, continuando con Traumeel LT y nosotros. veterinario. después de la cirugía tendría efectos beneficiosos en comparación con cada grupo de tratamiento solo.

Declaración de disponibilidad de datos

Las contribuciones originales presentadas en el estudio están incluidas en el artículo/Material complementario, las consultas posteriores pueden dirigirse al autor o autores correspondientes.

Declaración ética

Los estudios con animales fueron aprobados por el consejo regional de Giessen en Hessen (Alemania) con el número G 94/2019. Los estudios se llevaron a cabo de acuerdo con la legislación local y los requisitos institucionales. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de los propietarios para la participación de sus animales en este estudio.

Contribuciones de los autores

JL: Conceptualización, Curación de datos, Análisis formal, Investigación, Redacción – borrador original, Redacción – revisión y edición. MW: Supervisión, Redacción – borrador original, Redacción – revisión y edición. NB: Conceptualización, Metodología, Supervisión, Redacción – revisión y edición. SM: Metodología, Redacción – borrador original, Redacción – revisión y edición. KF: Conceptualización, Redacción – revisión y edición. KB: Metodología, Software, Redacción – revisión y edición. AH: Metodología, Redacción – revisión y edición. MM: Metodología, Redacción – revisión y edición. MR: Conceptualización, Supervisión, Redacción – revisión y edición.

Financiación

El/los autor/es declara(n) que se recibió apoyo financiero para la investigación, autoría y/o publicación de este artículo. El estudio fue financiado exclusivamente por Heel GmbH, Baden-Baden, Alemania, que empleó al autor MW. El financiador proporcionó apoyo en forma de compensación financiera para el estudio y el salario del autor MW. El financiador participó en el diseño del estudio.

Conflicto de intereses

MW era empleada de Biologische Heilmittel Heel GmbH. SM era empleada de Laboklin GmbH & Co. KG.

El resto de los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un potencial conflicto de intereses.

Nota del editor

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Material complementario

El material complementario para este artículo se puede encontrar en línea en: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fvets.2024.1342345/full#supplementary-material

Referencias