Ronald H. L. Li^1,2*Meg Shaverdian³Cheyenne Chen³Claire Stuhlmann³Joshua A. Stern^1,2Nghi Nguyen³

• ¹Departamento de Ciencias Clínicas, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Estatal de Carolina del Norte, Raleigh, Carolina del Norte, Estados Unidos
• ²Centro de Salud Felina, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad Estatal de Carolina del Norte, Raleigh, Carolina del Norte, Estados Unidos
• ³Departamento de Ciencias Quirúrgicas y Radiológicas, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad de California, Davis, Davis, CA, Estados Unidos

Objetivo: Caracterizar la expresión del receptor tipo toll tipo 4 (TLR4) en plaquetas felinas y evaluar el potencial de cebado del lipopolisacárido de Escherichia coli (LPS) en presencia o ausencia de agonistas fisiológicos. Además, se investigaron los efectos posteriores de la activación de TLR4 sobre la señalización mediada por ácido araquidónico (AA).

Métodos: Se inscribiron dieciocho gatos sanos propiedad de personal y alumnos. Las plaquetas lavadas preparadas a partir de sangre total se analizaron para expresión total y superficial de TLR4 utilizando Western bloting, citometría de flujo y microscopía de inmunofluorescencia de superresolución en presencia o ausencia de estimulación. El potencial de cebado del LPS se evaluó midiendo la secreción de gránulos alfa por expresión de P-selectina y la generación de tromboxano_{B 2} (TxB₂), como sustituto de_{TxA 2}, en respuesta a adenosina difosfato (ADP) o AA utilizando citometría de flujo y ELISA, respectivamente. Para examinar más a fondo la señalización dependiente de TLR4, se cuantificó la fosforilación de la fosfoproteína estimulada por vasodilatadores (P-VASP) tras la estimulación con AA y LPS de Rhodobacter sphaeroides (LPS-RS).

Resultados: La estimulación de la trombina aumentó significativamente tanto la expresión de plaquetas en la superficie como en la total. Aunque la LPS por sí sola no inducía la secreción de α-gránulo con o sin ADP, revirtió el efecto inhibitorio de la AA al mejorar la expresión de P-selectina y potenciar la generación de_{TxB 2}. Este efecto cebado del LPS se medió a través de TLR4, resultando en una disminución del P-VASP citoplasmático, un marcador asociado a la inhibición plaquetaria.

Discusión: Este estudio es el primero en demostrar la expresión funcional de TLR4 en plaquetas felinas. La activación de TLR4 sensibiliza las plaquetas a la AA al aumentar la producción de_{TxA 2} y atenuar las vías inhibitorias dependientes de prostaglandinas. Estos hallazgos ponen de relieve un mecanismo novedoso por el cual el TLR4 plaquetario contribuye a la inmunotrombosis y puede promover el riesgo trombótico en gatos.