Establecimiento de un método ELISA indirecto para la detección de anticuerpos contra el coronavirus bovino basado en la proteína N



- 1Laboratorio clave del Ministerio de Educación para la protección y utilización de recursos biológicos especiales en China Occidental, Facultad de Ciencias de la Vida, Universidad de Ningxia, Yinchuan, China
- número arábigoLaboratorio Estatal Clave de Biología Etiológica Veterinaria, Facultad de Medicina Veterinaria, Universidad de Lanzhou, Instituto de Investigación Veterinaria de Lanzhou, Academia China de Ciencias Agrícolas, Lanzhou, China
El coronavirus bovino (BCoV) es un patógeno importante responsable de la diarrea neonatal de los terneros, la disentería invernal en el ganado adulto y las enfermedades respiratorias bovinas. La infección por el virus puede provocar diarrea hemorrágica, disminución de la producción de leche y resultados potencialmente mortales en el ganado, lo que tiene repercusiones económicas considerables para la industria ganadera. La gestión eficiente del BCoV se basa en técnicas de detección rápidas y precisas. Las células CHO se utilizaron para expresar una proteína de nucleocápside recombinante (N) secretada, mediante la cual se generaron anticuerpos policlonales (pAb) de conejo a través de la inmunización. Se estableció un ensayo de inmunoabsorción enzimática indirecta (iELISA) basado en la proteína N para la detección de anticuerpos BCoV. Las condiciones de reacción se optimizaron utilizando un enfoque de tablero de ajedrez, con la concentración óptima de antígeno a 1,25 μg/mL y la dilución óptima de anticuerpos a 1:200, el valor de corte que distingue las muestras de suero negativas y positivas fue de 0,986. La prueba de sensibilidad indicó que este Ab de conejo tenía una dilución máxima de 218 dentro del rango de ensayo, no reaccionó de forma cruzada con muestras de suero BHV-1, BVDV, BRV y BRSV positivos, y mostró una gran especificidad. Se utilizaron el método iELISA desarrollado y el kit comercial para analizar 58 muestras de suero bovino, y la tasa de concordancia fue del 94,83%. En resumen, hemos desarrollado un método iELISA rentable y preciso basado en la proteína N que sirve como una herramienta diagnóstica útil para el BCoV en muestras clínicas e investigación epidemiológica.
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