Resumen

El cuerpo lúteo bovino (CL) es fundamental para el establecimiento y mantenimiento del embarazo mediante la secreción de progesterona (P₄). Las células luteales bovinas primarias (PBLC), el modelo central in vitro para la investigación reproductiva y esteroidogénesis, están severamente limitadas por el alto coste de aislamiento, la heterogeneidad celular y la capacidad proliferativa restringida. En este estudio, establecimos una línea celular lútea bovina inmortalizada con capacidad proliferativa in vitro estable, denominada células lúteas bovinas inmortalizadas SV40 T-inmortalizadas (SV40T-IBLC), mediante la transducción lentiviral del gen del antígeno T del virus simio 40 (SV40). Las células inmortalizadas mostraban una morfología típica similar a la epitelial con abundantes pequeñas gotas lipídicas citoplasmáticas. Secretaron múltiples hormonas funcionales, incluyendo P₄ y oxitocina, expresaron sinaptofisina, una proteína marcadora clave de las células lúteas funcionales maduras, y mantuvieron una expresión estable de genes esteroidogénicos y proteínas centrales como STAR, 3β-hidroxisteroid deshidrogenasa (3β-HSD), CYP11A1 y PTGFR, sin que los niveles de ARNm de estos genes clave mostraron diferencias significativas respecto a los de PBLC cultivados en paralelo. Funcionalmente, SV40T-IBLC_{mostró secreción} de P 4 dependiente del tiempo, con una concentración de P₄ en el sobrenadante de cultivo que alcanzó 1,89 ± 0,14 ng/mL a 60 horas, lo cual fue totalmente coherente con el nivel secretor y el patrón dinámico de PBLC. Tras un cultivo continuo in vitro hasta el paso número 50, las células mantuvieron un cariotipo diploide normal (29 pares de autosomas y 1 par de cromosomas sexuales XX), y no se observó evidencia de transformación maligna en el ensayo de crecimiento independiente del anclaje ni en el ensayo in vivo de tumorigenicidad en ratones desnudos. Además, el cocultivo con SV40T-IBLC mejoró significativamente la viabilidad de las células epiteliales endometriales bovinas (BEEC) en un 34,2% tras 72 horas de coincubación (p < 0,01), incrementó la abundancia de gotas lipídicas intracelulares de BEEC y aumentó la expresión de ARNm de genes relacionados con la receptividad endometrial, incluyendo EGF y LIF, sin alteraciones significativas en la tasa de apoptosis de BEEC. En conclusión, esta línea celular inmortalizada conserva las características funcionales centrales de la PBLC, proporcionando un modelo in vitro estable y homogéneo para la investigación reproductiva bovina.