Recientemente se ha descrito la presencia de estafilococos no aureus (NAS) en heces rectales bovinas. Al igual que otros patógenos causantes de mastitis, la excreción del NAS en el medio ambiente podría provocar una infección intramamaria. El objetivo de este estudio fue investigar si las cepas de NAS presentes en las heces pueden causar infección intramamaria, probablemente a través de la colonización del ápice del pezón. Durante un estudio transversal en 5 hatos lecheros, se recolectaron muestras de los hábitats cuarto de leche, ápices de pezones y heces rectales del 25%, 10% y 25% de las vacas lactantes, respectivamente, con una vaca que sirvió como fuente de un solo tipo de muestra. Las muestras de casos clínicos de mastitis también se recolectaron continuamente durante el período de estudio de 1 año. Las 6 especies de NAS más prevalentes, Staphylococcus (S.) chromogenes, S. cohnii, S. devriesei, S. equorum, S. haemolyticus y S. hominis, se subtipificaron aún más mediante amplificación aleatoria de la reacción en cadena de la polimerasa del ácido desoxirribonucleico polimórfico (RAPD-PCR), cuando la misma especie de NAS estaba presente en el mismo rebaño en los tres hábitats. En el caso de S. chromogenes, S. cohnii, S. devriesei y S. haemolyticus, se encontró el mismo tipo de RAPD en las heces rectales, los ápices de los pezones y los cuartos de leche, lo que indica que el NAS fecal puede infectar la glándula mamaria. Para S. hominis y S. equorum, no pudimos confirmar la presencia de los mismos tipos de RAPD en los tres hábitats.