Jiying Yin¹Zehui Zhou¹Ning He¹Hongming Zhou¹Xiaoqun Liu¹Yixing Zhao¹Longge Zhao¹Jiating Zhang¹Yanan Zhu¹Ying Zong²Naichao Diao²Kun Shi^2*Rui Du^2,3,4*

• ¹Facultad de Ciencia y Tecnología Animal, Universidad Agrícola de Jilin, Changchun, Jilin, China
• ^{número arábigo}Facultad de Materiales Medicinales Chinos, Universidad Agrícola de Jilin, Changchun, Jilin, China
• ³Laboratorio de Producción y Aplicación de Productos de Ciervo Sika de la Provincia de Jilin, Universidad Agrícola de Jilin, Changchun, China
• ⁴Laboratorio Clave de Producción Animal, Calidad y Seguridad de los Productos, Ministerio de Educación, Universidad Agrícola de Jilin, Changchun, China

Introducción: El virus de la diarrea viral bovina (BVDV) es uno de los principales patógenos que actualmente pone en peligro a la industria ganadera mundial. Plantea serias dificultades en la prevención y el tratamiento porque puede infectar al ganado de todas las edades y el mecanismo específico de su transmisión de célula a célula aún no se ha aclarado por completo. Los nanotubos de efecto túnel (TNT) son túbulos ricos en F-actina que se conectan al citoplasma de las células cercanas. Se ha descubierto que desempeñan un papel importante en la transmisión de varios virus, pero no se han informado estudios sobre BVDV en TNT.

Métodos: En primer lugar, se empleó el ensayo transwell para investigar las rutas de transmisión de BVDV y su capacidad para propagarse a través de estructuras de unión intercelular en presencia de anticuerpos neutralizantes. En segundo lugar, la caracterización preliminar de estas estructuras de unión se realizó mediante experimentos de intervención farmacológica utilizando el estabilizador de microtúbulos paclitaxel, el disruptor de microtúbulos nocodazol, los disruptores de la actina F ciclosporina D y espongiosina A, y el bloqueador de la unión gap glicina. Posteriormente, validamos la composición, el posicionamiento espacial, la morfología microscópica y las características de generación de las estructuras de unión intercelular después de la infección por BVDV. Finalmente, las técnicas de imagen dinámica de fluorescencia de células vivas iSTORM y las técnicas de imagen dinámica de células vivas, observamos la transmisión de partículas virales de BVDV a través de TNT.

Resultados: Los ensayos de Transwell demostraron que el BVDV se puede transmitir a través del contacto intercelular directo, un modo de transmisión que no se ve afectado por los anticuerpos neutralizantes. Los estudios farmacológicos revelaron que solo los disruptores de la F-actina espongina A y la relaxina D celular inhibieron la formación de esta estructura, identificándola preliminarmente como un nanotubo de túnel. Los experimentos de validación confirmaron que la composición, la orientación espacial, la microestructura y la dirección de formación de esta estructura de conexión se alinean con las características de los nanotubos de efecto túnel, lo que corrobora aún más su identidad como TNT. iSTORM y las imágenes dinámicas de fluorescencia de células vivas revelaron que las partículas BVDV pueden atravesar los TNT para completar la infección intercelular.