Introducción

La tuberculosis (TB) es una enfermedad causada por miembros del complejo M. tuberculosis (MTC) que afecta a numerosas especies. Los dos agentes más comunes son M. tuberculosis, que afecta principalmente a los seres humanos, y M. bovis, que afecta a muchas especies diferentes de rumiantes y no rumiantes. Sin embargo, la infección por M. caprae, otro miembro del complejo que está cerca de M. bovis, está surgiendo y afecta a varios huéspedes diferentes, incluyendo cabras, vacas, ovejas, cerdos, conejos, jabalíes, ciervos rojos, zorros y también humanos (1-4). El espoligotipado ha demostrado ser muy útil para caracterizar las diferentes variantes para estudios epidemiológicos y para vincular brotes. Habida cuenta de sus efectos en la salud humana y de la relación de la tuberculosis bovina con los casos humanos, especialmente las formas digestivas en los niños causadas por la transmisión a través de la leche, pronto se emprendió la erradicación de la infección del ganado bovino en muchos países. El éxito de los programas diseñados para identificar y sacrificar bovinos infectados a través de la detección subclínica de infecciones los hizo obligatorios en muchos países y han definido los estándares para las políticas internacionales de sanidad animal (5). Dado que el enfoque principal de estos programas era prevenir la transmisión de la leche del CMT, su objetivo ha sido casi exclusivamente la especie bovina, que es la principal fuente de leche para el consumo humano. El menor riesgo asociado a la transmisión de la carne, el menor valor individual y el mercado restringido de la leche de pequeños rumiantes han atraído mucha menos atención al control de la tuberculosis en cabras y ovejas, por lo que estas especies no han sido incluidas en los programas de erradicación de la tuberculosis hasta hace muy poco, y aun así, solo en relación con los brotes de tuberculosis bovina (6, 7). Aunque el papel de las cabras fue ampliamente reconocido, durante mucho tiempo se consideró que las ovejas eran resistentes a las infecciones tuberculosas (8). Por lo tanto, la enfermedad se consideró extremadamente rara en esta especie (9, 10) y el Código Terrestre de la OMSA ni siquiera menciona a las ovejas con respecto a la tuberculosis (11). Sin embargo, estudios recientes han demostrado que la especie es totalmente susceptible y a menudo está infectada con micobacterias MTC en granjas mixtas bovinas y caprinas donde se ha detectado tuberculosis (7, 12–17). En este trabajo presentamos un caso de infección por CMT en una explotación mixta de ovino y caprino cuyo caso índice fue detectado por vigilancia pasiva en matadero y donde las pruebas celulares estándar no detectaron la gran mayoría de los individuos infectados, pero una prueba humoral multiespecie mostró una alta sensibilidad. Creemos que estas características de los casos, el brote solo de ovejas, el nuevo espoligotipo y el rendimiento superior de las pruebas humorales de las celulares, son características novedosas que, contribuyendo a la descripción de un modelo más complejo de tuberculosis bovina (18), deben tenerse en cuenta para que el control de la tuberculosis animal sea un objetivo alcanzable en un futuro no muy lejano.

Materiales y métodos

Se detectaron lesiones compatibles con TB en la inspección rutinaria del matadero (Matadero de Logroño, La Rioja, España) de una oveja sacrificada procedente de Laguardia (País Vasco, España) el 18 de abril de 2021 (ver cronología presentada en la Figura 1). Las muestras de las lesiones se enviaron al Laboratorio de Referencia de la Unión Europea (EU-RL) para TB Bovina (VISAVET-Universidad Complutense de Madrid) para cultivo de CMT, y se aisló M. caprae. El spoligotyping dio lugar a un nuevo patrón que se registró en la base de datos española MycoDB con el código SB2737. Las autoridades regionales de sanidad animal comprobaron inmediatamente que las cabras del rebaño habían sido negativas anualmente a la prueba cutánea (ST) para la tuberculosis desde que comenzó el programa de erradicación de la tuberculosis caprina en 2013 (el último control tuvo lugar el 31 de agosto de 2020). No había antecedentes de paratuberculosis en el rebaño, y nunca se había utilizado la vacuna contra la paratuberculosis. A continuación, se realizó una investigación de prevalencia que incluyó una prueba comparativa de tuberculina intradérmica (CITT) y un ELISA de anticuerpos (INgezim Tuberculosis DR; El 28 de junio de 2021 se encargó y realizó el INGENASA-Eurofins, Gold Standard Diagnostics) (19) en todo el rebaño (321 ovejas y 29 cabras). El ST se realizó e interpretó siguiendo las directrices EU-RL publicadas por el Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación (MAPA), que están de acuerdo con la normativa de la Unión Europea (Reglamento Delegado 2020/689 de la Comisión, de 17 de diciembre de 2019). A cabras y ovejas se les administró 0,1 mL DE PPD-B (2.500 UI) y PPD-A (2.500 UI) (vacunas CZ, Pontevedra, España) mediante inyecciones intradérmicas separadas en el cuello utilizando un Dermojet (Akra Dermojet, Pau, Francia). El grosor de la piel se midió antes y 72 h después de la inoculación. Se realizó interpretación tanto para la prueba de tuberculina intradérmica única (SITT) como para la prueba comparativa de tuberculina intradérmica (CITT). Un animal se consideró SITT positivo, no concluyente o negativo cuando el aumento del sitio PPD-B fue de 4 mm o más, entre 2 mm y 4 mm, o menos de 2 mm, respectivamente. Para el CITT, los animales se consideraron positivos, no concluyentes o negativos si el aumento del sitio de inyección de PPD-B excedió el del sitio de PPD-A en más de 4 mm, 1-4 mm y menos de 1 mm, respectivamente. El ELISA de anticuerpos se ejecutó e interpretó de acuerdo con las instrucciones del proveedor. A las 72 h de lectura de ST, solo tres ovejas y un carnero dieron positivo al ST (según la interpretación de SITT y CITT) y fueron enviados a los laboratorios NEIKER-BRTA para su necropsia el 6 de julio de 2021. Se detectaron anticuerpos contra la proteína MPB83 de Mycobacterium bovis (conservada también en M. caprae) mediante ELISA en 41 ovejas (37 positivas y 4 dudosas), incluidas tres de las cuatro personas ST positivas. Se confirmaron lesiones características de la tuberculosis y se aisló SB2737 M. caprae de las cuatro ovejas necropsiadas. Posteriormente, se sacrificaron las ovejas restantes (excepto tres) con resultado positivo o dudoso de ELISA (n = 35) (15 de julio de 2021) y se extrajo sangre para la prueba de ensayo de liberación de interferón γ (IGRA). Para la IGRA, la heparina sódica se distribuyó en placas de cultivo celular (1,5 ml/pocillo) y se estimuló con PPD-B, PPD-A (ambas PPD a 20 μg/ml) y solución salina tamponada con fosfato (PBS; sin estimulación) en pocillos individuales (no se incluyó mitógeno), a partir de las 4 h posteriores a la extracción de sangre. Después de la incubación nocturna a 37 °C en 5% de CO₂ atmósfera, las muestras se centrifugaron y los sobrenadantes se analizaron utilizando el kit de ELISA de interferón-gamma de® interferón para rumiantes validado por MAPA (IDvet, Grabels, Francia) siguiendo las instrucciones del fabricante. Los resultados se interpretaron de acuerdo con las indicaciones del kit (corte positivo: s/p ≥ 16). Durante la necropsia, todos los tejidos fueron inspeccionados macroscópicamente y se recolectaron muestras para análisis histopatológico (pulmón, hígado, bazo, intestino, páncreas y ganglios linfáticos mediastínicos, traqueobronquiales, traqueales, hepáticos, mesentéricos, ileocicales y ruminales) y microbiológico (ganglios linfáticos mediastínicos). En todos ellos se confirmó la infección por M. caprae excepto en tres (uno de los ELISA dudosos y dos ELISA positivos). Dada la alta seroprevalencia detectada con el ELISA de anticuerpos y la alta tasa de confirmación de infección entre los positivos, se realizó un ELISA de anticuerpos anamnésicos (23 de julio). Ante el aumento de la seroprevalencia detectado con el ELISA anamnésico, entre el 13 y el 19 de agosto de 2021 se envió al matadero todo el rebaño, incluidas las cabras. Esta vez, 24 de las 200 ovejas que mostraron un resultado negativo en ambas pruebas de ELISA, y todas las cabras (n = 29) fueron sometidas a necropsia y aislamiento de MTC. Se realizó una inspección macroscópica de todos los tejidos y un examen microscópico de los ganglios linfáticos pulmonares y mediastínicos y traqueobronquiales. Las muestras de tejidos con lesiones o de un grupo de los tejidos especificados anteriormente si las lesiones no estaban presentes se sometieron a cultivo de aislamiento de MTC. La infección tuberculosa se confirmó si se observaron lesiones tuberculosas y/o se aisló M. caprae. Así, un total de 93 animales (64 ovinos y 29 caprinos) fueron necropsiados y tuvieron resultados patológicos y microbiológicos, además de los resultados de las pruebas in vivo.

Figura 1. Resumen cronológico de los acontecimientos y actuaciones llevadas a cabo en relación con el brote de tuberculosis detectado en la explotación mixta caprina-ovina. * Una oveja solo tenía un registro de CITT en el control del 28 de junio.

La investigación epidemiológica incluyó la recolección de información para determinar el manejo, las tasas de reposición, la procedencia de los animales comprados, los posibles contactos con otras granjas y los brotes recientes de tuberculosis en el municipio. Los puntos de bebedero en el área de pastoreo se investigaron para MTC mediante cultivo de aislamiento.

Se utilizó la prueba de probabilidad exacta (FET) de Fisher para la comparación de frecuencias (20). Se calculó una sensibilidad complementaria como el porcentaje de positivos a una prueba y negativos a la prueba de referencia sobre el número total de positivos en la prueba de referencia. Esta figura da una medida de cuánto supera una prueba a la referencia con la que se compara (21). Se llevó a cabo un modelo lineal generalizado y un análisis de correlación para evaluar la asociación de la edad con la densidad óptica (DO) de las pruebas inmunológicas utilizando el software estadístico jamovi (20, 22).

Resultados

En la Tabla 1 se muestra un resumen de los animales según diferentes criterios de agrupación y resultados de las pruebas. Un total de 351 animales (322 ovejas y 29 cabras) fueron procesados en diferentes momentos y con diferentes métodos (ver Figura 1). En la explotación estaban presentes cuatro razas de ovino (70,9% raza navarra). Alrededor de dos tercios eran reproductores de 24 meses o más. Solo el 1,2% reaccionó positivamente en la prueba intradérmica. Por el contrario, hubo alrededor de 10 veces más animales positivos (12,8%) en la primera prueba de ELISA y el doble (28,4%) en el ELISA anamnésico. En conjunto, el ELISA identificó un 37,27% de ovejas con anticuerpos positivos. La infección se confirmó en el 94,6% (35/37) de los individuos positivos/dudosos del primer ELISA. El IGRA se aplicó solo a 35 de las 41 ovejas con anticuerpos ELISA/dudosos y fue positivo solo en 4 de ellas. En total, la TB fue confirmada patológica o microbiológicamente en 44 de las 64 ovejas investigadas (68,75%), incluido el caso índice. Sin embargo, de estos, 24 habían sido seleccionados al azar en el momento del sacrificio entre los que dieron negativo en la prueba. Dado que siete de ellas (29,2%) también fueron confirmadas con tuberculosis, se puede estimar que hubo alrededor de 77 ovejas infectadas adicionales que no se habían detectado. Esto haría que la prevalencia global en el rebaño ovino alcanzara el 37,5% (121 de 323). La edad de estos animales seleccionados al azar fue significativamente menor que la del resto (p = 0,0187). La edad se correlacionó positivamente con las lecturas de DO en el ELISA anamnésico (r = 0,2235, p = 0,0002) y su aumento (r = 0,1292, p = 0,0455), pero no con las lecturas de DO en el primer ELISA de anticuerpos (r = −0,0880, p = 0,1418), ni con el antígeno bovino en IGRA (r = −0,0483, p = 0,7830).

Tabla 1. Resultados generales en ovejas.

El rendimiento del método diagnóstico mostró grandes diferencias en cuanto a la sensibilidad (Tabla 2). Mientras que ambas pruebas celulares estándar tenían una sensibilidad baja de alrededor del 10%, el ELISA tenía una sensibilidad superior al 80%. Estas cifras condujeron a un alto rendimiento superior del ELISA en relación con las pruebas celulares (más del 700%), que, sin embargo, solo tuvieron una sensibilidad complementaria del 7% en relación con el estado de tuberculosis post-mortem.

Tabla 2. Realización de las pruebas.

Curiosamente, todas las ovejas tenían muy buena condición corporal y 24 de las 44 ovejas con infección confirmada tenían lesiones pulmonares de tuberculosis (54,5%). Se aisló C. pseudotuberculosis de un animal negativo en el ELISA y cuyas lesiones macroscópicas en pulmón eran histológicamente compatibles con pseudotuberculosis, pero que produjo M. caprae del ganglio linfático traqueobronquial. La mayoría de las lesiones se observaron en los ganglios linfáticos (61,9%), mientras que solo el 36,5 y el 7,9% en pulmón y vísceras, respectivamente. Las lesiones fueron muy similares a las observadas en la TB bovina típica: múltiples focos necróticos coalescentes de color amarillo pálido con intensa mineralización y fibrosis tanto en los ganglios linfáticos como en los pulmones. No se encontraron diferencias significativas según raza (FET p = 0,3023) ni sexo en el primer ELISA, pero los adultos tuvieron una seroprevalencia significativamente mayor (16,9% vs. 5,9%; p = 0,0051). En el ELISA anamnésico, las diferencias de raza y edad fueron altamente significativas (Tabla 2), pero no el sexo. Tomados conjuntamente, solo la diferencia entre adultos (52,0%) y corderos (11,9%) fue estadísticamente significativa (p < 0,0001).

Todas las cabras fueron negativas a todas las pruebas diagnósticas realizadas (ST, IGRA, ELISA y métodos patológicos y microbiológicos).

El rebaño fue el último de la aldea en utilizar el sistema de manejo tradicional de caminar diariamente desde la granja hasta los campos circundantes con residuos de cultivos y pasto espontáneo entre cosechas. Los piensos se compraron a los productores registrados y la paja a los productores locales. Las ovejas y las cabras pasaban los días juntas en el camino y pastando, pero se alojaban en establos separados para pasar las noches. La tasa media de reposición durante los últimos 4 años fue del 38,1% para las ovejas y del 18,7% para las cabras, con tasas de sacrificio similares. En 2018 se introdujeron criadores de ovejas de la misma provincia o de una vecina (10 de la misma provincia, nueve de la provincia vecina), 2019 (38 de la provincia vecina) y 2020 (15 de la misma provincia, uno de la misma provincia vecina). En 2021 se introdujeron un total de seis cabras de la misma provincia. En 2014 se produjo un brote de tuberculosis en una granja caprina del mismo municipio causado por el espoligotipo SB0416 de M. caprae y provocó su finalización. Los puntos de consumo fueron negativos para MTC.

Discusión

La inspección rutinaria del matadero permitió detectar una infección no aparente por CMT en un rebaño mixto de ovejas y cabras. Esto subraya la importancia de este tipo de vigilancia (23), que depende en gran medida del buen desempeño de los veterinarios de salud pública, y subraya la importancia de la colaboración entre ellos y los servicios de sanidad animal (24-26). Nuestros resultados refuerzan aún más la necesidad de asignar los recursos que garanticen un desempeño eficiente de este método de vigilancia (27, 28). Hay que tener en cuenta que el caso índice fue una oveja sacrificada de forma rutinaria debido a la producción, no por razones clínicas, de un rebaño mixto con una población caprina que se había sometido a pruebas cutáneas anuales de tuberculosis en los últimos 8 años antes (última prueba el 31 de agosto de 2020), siempre con resultados negativos. El anticuerpo comercial ELISA utilizado en este caso permitió la detección del 82,5% de las ovejas positivas para cultivo de las 63 que fueron necropsiadas (el caso índice no se analizó mediante ELISA). La cifra fue ligeramente inferior si se tomaron como referencia los positivos a cultivo o patología (81,4%). El TS solo detectó el 9,3% de los positivos a cualquiera de estos dos métodos de referencia y el IGRA solo el 12,5%. Esto puede parecer sorprendente ya que se ha considerado que las pruebas de inmunidad humoral tienen baja sensibilidad en bovinos (29, 30). A pesar de la evidencia científica que señala que podría complementar muy específicamente la sensibilidad de las pruebas basadas en la inmunidad celular (detección de hasta un 33% adicional de animales infectados no identificados por pruebas celulares) (28, 30), su uso aún no se ha incorporado a los programas de control bovino (29, 31). El único otro gran estudio de TB en ovejas mostró tasas de prevalencia similares entre el aislamiento (50,4%), la histopatología (83,2%) y el ELISA (59,0%), pero mucho más bajas para IGRA (4,9%) y ST (24,9%), con tasas de sensibilidad altamente concordantes (93,5 a 100%) para los tres primeros. Aunque los cálculos de sensibilidad y especificidad se basaron en un pequeño número de casos (23 y 31, respectivamente), las bajas tasas de especificidad (37,5-50,0%) encontradas sugieren que muchos casos realmente infectados podrían no haber sido detectados en lugar de ser falsos positivos y, por lo tanto, probablemente indicando que la prevalencia real era sustancialmente mayor (6). Los análisis cualitativos y cuantitativos indican que la infección aumenta con la edad. Eso podría explicar por qué el ELISA de anticuerpos que falta en algunos casos podría deberse a los bajos niveles de anticuerpos en infecciones recientes. En general, este patrón de respuesta diagnóstica inmunitaria debe tenerse muy en cuenta, ya que significa que las técnicas oficiales de diagnóstico celular para el diagnóstico de la tuberculosis en bovinos y caprinos podrían estar fallando dramáticamente en la identificación de un posible reservorio oculto de CMT en una especie doméstica importante y bien gestionada, pero que no se somete a controles periódicos para la detección de la infección. Si añadimos los recientes hallazgos de TB en cerdos criados en libertad (32-36), se hace evidente que es urgente incluir especies domésticas no bovinas en los programas de erradicación aprovechando los nuevos protocolos mejorados de diagnóstico de TB humoral. Si bien estos conocimientos cubren todos los ángulos en un programa de erradicación tan costoso y avanzado centrado en una sola especie, no se puede pasar por alto que este brote fue causado por un espoligotipo totalmente nuevo que podría tener particularidades patógenas y epidemiológicas específicas, tales como: baja virulencia y alta adaptación de las ovejas. De hecho, el hecho de que la investigación epidemiológica no haya señalado un origen sugiere que la bacteria podría haber estado evolucionando en este rebaño de ovejas adquiriendo nuevas características clinicopatológicas y epidemiológicas que eventualmente podrían requerir un estatus taxonómico más alto. Sin embargo, las lesiones no mostraron ningún rasgo patológico que pudiera atribuirse a una particularidad diferencial de esta cepa específica. Una mayor caracterización de la cepa (por ejemplo, la secuenciación del genoma completo) podría arrojar luz en este sentido.

En términos generales, las pruebas celulares han demostrado ser mucho más sensibles que las humorales para el diagnóstico de TB bovina en bovinos sometidos a programas periódicos de erradicación de TB. Sin embargo, estos resultados confirman nuestra propia experiencia inédita en bovinos de que las pruebas de anticuerpos podrían complementar a las celulares para la detección de individuos residuales/anérgicos, ya que las primeras detectan menos casos pero aún tienen una alta sensibilidad complementaria para identificar infecciones residuales que las pruebas celulares no detectan. Estos casos podrían explicar por qué en España, hasta el 25,3% de los rebaños infectados por tuberculosis bovina se atribuyen a una infección interna residual o externa no detectada, según el último informe del Ministerio de Agricultura español sobre tuberculosis bovina (37) que también confirma una observación anterior que informaba de un 22,3% (28). La prueba cutánea ha estado en servicio durante más de un siglo y ha permitido un éxito rotundo, pero la evidencia actual de que unos pocos individuos infectados aún no se detectan a pesar de las recurrentes y enormes inversiones administrativas y económicas deberían mostrarnos el camino para adoptar un nuevo enfoque. Sabiendo que las pruebas humorales proporcionan una sensibilidad adicional que se acerca a las tasas observadas de nuevos brotes de tuberculosis residuales e importados, parece claro que es necesario un gran avance. A diferencia de otros estudios, en este caso las pruebas celulares, incluido el IGRA, tienen una sensibilidad mucho menor (alrededor de un tercio) que el ELISA que, en realidad, tenía una sensibilidad complementaria del 7,0% en relación con la patología combinada y el aislamiento. En un estudio irlandés publicado recientemente (38) en el que se informó que el 30,7 % de los bovinos habían dado negativo en la prueba comparativa oficial, aunque positivo en una prueba comercial de anticuerpos muy específica, con una especificidad homologada por la OMSA del 99,7 % (39), los autores sugieren que los resultados serológicos podrían estar relacionados con pruebas cutáneas intensivas. Sin embargo, también podría estar relacionado con una sensibilidad limitada del ST cuando la infección residual/anérgica (no detectada por el ST) es más significativa de lo esperado.

Hay otro hallazgo sorprendente de este estudio que va en contra del conocimiento generalmente aceptado sobre la tuberculosis. Es que la infección fue muy prevalente en las ovejas, pero no en las cabras. Las cabras han sido reconocidas durante mucho tiempo como un huésped de infecciones por CMT e incluso han llevado a nombrar a la especie bacteriana M. caprae (40-42). El hecho de que en este rebaño mixto todas las cabras hayan dado negativo en las pruebas repetidas y sigan siendo negativas en todas las pruebas cuando las ovejas tenían una prevalencia tan alta es, de hecho, un hallazgo extraordinario que desafía la comprensión previa de la epidemiología de la tuberculosis en rumiantes domésticos y debe tenerse en cuenta en la planificación futura de los programas de control de la tuberculosis bovina. Las ovejas ya no pueden ser ignoradas en la epidemiología de la tuberculosis, que ya no debe definirse como bovina (11).

En cuanto a la autopsia, el 54,5% de los ovinos tuberculosos presentaban lesiones de TB en pulmones. Es decir, alrededor de la mitad de los animales infectados tenían lesiones solo en los ganglios linfáticos que requirieron un examen post-mortem exhaustivo. Es probable que la similitud aproximada de las lesiones de tuberculosis con la linfadenitis caseosa, junto con la suposición de que la tuberculosis ovina es rara, haya contribuido en gran medida a pasar por alto la tuberculosis ovina.

Este patrón silencioso de infección por tuberculosis en ovejas descrito aquí, basado en estudios previos que indican una prevalencia insospechadamente alta en granjas de especies mixtas (6), hace temer que un enorme reservorio de infección en una especie doméstica podría haber sido pasado por alto en todo el mundo por un problema técnico. Es urgente abordarlo mediante la ampliación del uso de pruebas humorales para ayudar a neutralizar el impacto de las infecciones ocultas por CMT en los programas de control de la tuberculosis bovina.

Si no se utilizan las pruebas de anticuerpos más baratas y más sensibles a los complementos, para la detección de infecciones residuales podría ser imposible erradicar eficazmente la tuberculosis bovina en muchos países una vez que se haya llegado a sus últimas etapas. Dada la eficacia de la vigilancia pasiva en los mataderos, complementar la inspección visual con la aplicación sistemática (todos los animales, un porcentaje, o sólo los procedentes de granjas o condados sospechosos o desconocidos de tuberculosis, según el estado epidemiológico y la disponibilidad de recursos) de las pruebas serológicas relativamente poco costosas podría convertirse en una herramienta poderosa para rastrear las granjas infectadas por tuberculosis no detectadas. Creemos que en un momento en el que los programas europeos de erradicación de la tuberculosis han alcanzado una erradicación regional sustancial, el reconocimiento de ELISA como prueba oficial tanto para el ganado bovino como para otras especies susceptibles a la tuberculosis y la generalización de su uso en la detección activa de la infección tuberculosa debería ser muy eficaz para reducir los riesgos de exposición de los seres humanos y el ganado. En resumen, tras el reconocimiento de la compleja epidemiología determinada por el hecho de que el ganado comparta ambientes con otras especies susceptibles a la tuberculosis, como los rumiantes silvestres y domésticos, los conejos (43), los jabalíes e incluso los tejones (41, 42, 44–50), la adaptación de los métodos de diagnóstico a la epidemiología y patogénesis de especies específicas podría conducir de manera más eficiente a un control más rápido de la tuberculosis.

Declaración de disponibilidad de datos

Los conjuntos de datos presentados en este estudio se pueden encontrar en repositorios en línea. Los nombres de los repositorios y los números de acceso se pueden encontrar en: https://www.visavet.es/mycodb/index-en.php, SB2737.

Declaración ética

No se requirió aprobación ética para los estudios con animales de acuerdo con la legislación local y los requisitos institucionales, ya que este estudio se llevó a cabo como parte de un programa de control de Salud Animal aprobado por la UE y España llevado a cabo por la autoridad local de Salud y Bienestar Animal. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de los propietarios para la participación de sus animales en este estudio.

Contribuciones de los autores

RJ: Conceptualización, Análisis formal, Investigación, Metodología, Redacción – borrador original, Escritura – revisión y edición. LF-V: Investigación, Metodología, Redacción – revisión y edición. MF: Investigación, Metodología, Redacción – revisión y edición. IF: Curación de datos, Investigación, Metodología, Redacción, revisión y edición. GC: Investigación, Metodología, Redacción – Revisión y Edición. MG: Investigación, Escritura – Revisión y Edición. JG: Conceptualización, Curación de datos, Obtención de fondos, Investigación, Metodología, Administración de proyectos, Redacción, revisión y edición. IS: Conceptualización, Curación de datos, Análisis formal, Obtención de fondos, Investigación, Metodología, Administración de proyectos, Redacción, revisión y edición.

Financiación

El/los autor/es declara(n) haber recibido apoyo financiero para la investigación, autoría y/o publicación de este artículo. Este estudio se ha llevado a cabo en parte con fondos de la subvención PID2019-105155RB-C33 y la subvención PID2022-142939OR-C21, financiada por MCIN/AEI/10.13039/501100011033 y por «FEDER: Una manera de hacer Europa».

Reconocimientos

Los autores están en deuda con el propietario de la finca, que facilitó todo tipo de facilidades para el estudio del caso. Agradecemos al personal del Matadero de Logroño y a los Servicios de Salud Pública del Gobierno de La Rioja la inspección de las canales, la recogida de muestras y la remisión a NEIKER. También queremos agradecer a ABERE ZERBITZU TEKNIKOAK KOOP su excelente colaboración en la recogida de información y en el diagnóstico de campo y recogida de muestras. LF-V cuenta con una beca predoctoral del Departamento de Desarrollo Económico, Sostenibilidad y Medio Ambiente del Gobierno Vasco.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto de intereses.

El/los autor/es declararon, en el momento de la presentación, ser miembro del consejo editorial de Frontiers. Esto no tuvo ningún impacto en el proceso de revisión por pares ni en la decisión final.

Nota del editor

Todas las afirmaciones expresadas en este artículo son únicamente las de los autores y no representan necesariamente las de sus organizaciones afiliadas, ni las del editor, los editores y los revisores. Cualquier producto que pueda ser evaluado en este artículo, o afirmación que pueda ser hecha por su fabricante, no está garantizado ni respaldado por el editor.

Material complementario

El material complementario para este artículo se puede encontrar en línea en: https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fvets.2023.1310205/full#supplementary-material

Referencias