Jabalí transgénico portador de proteasomas fluorescentes verdes

Entre sus muchas funciones, el sistema ubiquitina-proteasoma regula la proteólisis específica del sustrato durante el ciclo celular, la apoptosis y la fertilización y en patologías como la enfermedad de Alzheimer, el cáncer y la cirrosis hepática. Los proteasomas están presentes en los espermatozoides humanos y de jabalí, pero se sabe poco sobre las interacciones de las subunidades proteasómicas con otras proteínas o estructuras de los espermatozoides. Hemos creado un jabalí transgénico con proteína verde fluorescente (GFP) etiquetada con la subunidad del núcleo proteasómico 20S α-tipo 1 (PSMA1-GFP), con la hipótesis de que la proteína de fusión PSMA1-GFP se incorporará en proteasomas de esperma funcionales. Utilizando imágenes de epifluorescencia directa y detección de inmunofluorescencia indirecta, hemos confirmado la presencia de PSMA1-GFP en el acrosoma del esperma. La transferencia de Western reveló una banda de proteína correspondiente a la masa predicha de la proteína de fusión PSMA1-GFP (57 kDa) en los espermatozoides transgénicos. La fertilidad del verraco transgénico se confirmó mediante fertilización in vitro, que dio como resultado blastocistos transgénicos, y por apareamiento, lo que resultó en una descendencia transgénica sana. La inmunoprecipitación y el análisis proteómico revelaron que PSMA1-GFP se copurifica con varias proteínas asociadas a la membrana acrosómica (p. Ej., Lactadherina / glóbulo graso de la leche E8 y espermadhesina alanina-triptófano-asparagina). La interacción de MFGE8 con PSMA1-GFP se confirmó mediante inmunoprecipitación cruzada. Las proteínas identificadas que interactúan con el proteasoma pueden regular la actividad proteasómica de los espermatozoides durante la fertilización o pueden ser los sustratos de la proteólisis proteasómica durante la fertilización. El análisis proteómico también confirmó la interacción / coinmunoprecipitación de PSMA1-GFP con 13/14 subunidades del núcleo proteasómico. Estos resultados demuestran que el PSMA1-GFP se incorporó en los proteasomas de esperma ensamblados. Este mamífero portador de proteasomas fluorescentes verdes será útil para estudios de fertilización y dondequiera que el sistema ubiquitina-proteasoma juegue un papel en la función o patología celular.

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