1 Introducción

La enfermedad del gusano del corazón canino (HWD, por sus siglas en inglés) es una enfermedad transmitida por mosquitos potencialmente mortal causada por el nematodo Dirofilaria immitis, que afecta tanto a perros salvajes como domésticos con distribución mundial e importancia global (1, 2). Los gusanos del corazón residen en las arterias pulmonares del huésped canino definitivo, causando endarteritis proliferativa que puede progresar a remodelación vascular crónica, hipertensión pulmonar e insuficiencia cardíaca congestiva del lado derecho (1, 3). La fisiopatología del daño de la HWD se basa en la respuesta del huésped al parásito [es decir, adultos y microfilarias (mfs)] y al endosimbionte bacteriano Wolbachia pipientis, que reside en todas las etapas biológicas de D. immitis, desencadenando la liberación de citoquinas proinflamatorias y quimiotácticas y conduciendo a la infiltración celular y amplificación de la respuesta inflamatoria (4, 5). La interacción inmunitaria inicial del huésped contra el parásito se engloba bajo el paraguas de la respuesta inmunitaria innata, que incluye el desarrollo de una respuesta de fase aguda (APR) (6, 7), siendo una reacción inespecífica y compleja que ocurre poco después de cualquier lesión tisular (por ejemplo, traumatismo, infección o inflamación) tratando de restaurar la homeostasis y eliminar la causa subyacente de la alteración (8, 9). En este contexto, se ha descrito una APR caracterizada por una variación en las concentraciones de proteínas de fase aguda (APP) como un aumento de la proteína C reactiva (PCR) no acompañada de aumentos de la haptoglobina como APP positiva, y una disminución de la albúmina y la paraoxonasa-1 (PON-1) como APP negativa en perros infectados por D. immitis (6, 7, 10). Además, también se ha descrito un aumento de la PCR en función de los grados de la enfermedad y una correlación entre la APP positiva como la PCR y la gravedad del daño de la arteriola pulmonar y la hipertensión pulmonar (11-13), lo que indica que los procesos inflamatorios podrían contribuir a la progresión de la enfermedad. Por lo tanto, aunque se necesita más investigación, los biomarcadores de inflamación como la APP parecen prometedores para evaluar el estado de los animales infectados por el gusano del corazón, diagnosticar los aspectos patológicos de la HWD y/o ayudar a establecer un pronóstico preciso (7).

En este escenario, la medición de la VSG es una prueba hematológica que se realiza comúnmente en medicina humana para medir la velocidad a la que los glóbulos rojos (RBC) se asientan en un tubo de sangre anticoagulada en una unidad de tiempo específica, más comúnmente una hora, para resaltar la aparición y el alcance de la inflamación (14, 15). Esta determinación ha vuelto recientemente a la palestra en medicina veterinaria, identificándose como un biomarcador inflamatorio útil y oportuno en casos de artritis reumatoide canina, artrosis, babesiosis, ehrlichiosis y enfermedad renal crónica felina (16-20).

Además, la VSG demostró ser un biomarcador sensible para el diagnóstico de formas activas de leishmaniosis canina por Leishmania infantum (CanL) (21), una enfermedad transmitida por flebótomos que reconoce una APR como parte de la inmunidad innata. Al igual que la HWD, la respuesta inflamatoria que caracteriza a la CanL en forma activa consiste en aumentos de la APP positiva, como la PCR, y disminuciones de la APP negativa, como la albúmina, la paraoxonasa 1 o la apolipoproteína 1. Además, la endemicidad de la CanL se solapa con frecuencia con la de la HWD (22), lo que lleva a una alta posibilidad de coinfecciones en áreas endémicas (23).

Por lo tanto, este estudio tiene como objetivos: (i) evaluar la VSG en perros infectados naturalmente por D. immitis; ii) comparar el nivel de VSG en perros infectados por el gusano del corazón con una población de perros infectados por el gusano del corazón y seropositivos para L. infantum, así como con un grupo de perros clínicamente sanos; (iii) evaluar la existencia de una correlación entre la VSG y otros parámetros de laboratorio (p. ej., APP) en perros infectados naturalmente por el gusano del corazón.

2 Materiales y métodos

2.1 Área de estudio y criterios de matrícula

Este estudio observacional prospectivo se llevó a cabo en un refugio de rescate ubicado en el sur de Italia (40.419326 N, 18.165582 E, región de Apulia, Lecce), un área endémica de D. immitis y L. infantum (22). De octubre de 2022 a enero de 2023, se inscribieron en el estudio perros seropositivos (es decir, «grupo Dirofilaria«) e infectados con L. infantum infectado con gusano del corazón (es decir, «grupo Dirofilaria/Leishmania«). Se consideró que los perros estaban infectados por el gusano del corazón si eran positivos en la prueba de Knott modificada para D. immitis mfs o en el ensayo de inmunoabsorción enzimática (ELISA) para D. immitis Ag. Además, en el grupo de Dirofilaria/Leishmania, los perros infectados con dirofilariosis se consideraron seropositivos para L. infantum si dieron positivo en una prueba de anticuerpos de inmunofluorescencia indirecta (IFAT) para anticuerpos contra L. infantum.^°°

Sobre la base del examen físico, la puntuación clínica y los resultados de laboratorio, que se realizan como se describe a continuación, también se ha incluido en el «grupo de control» una cohorte de perros considerados clínicamente sanos. Estos perros dieron resultados seronegativos para L. infantum, Anaplasma phagocytophilum y Ehrlichia canis por IFAT, y negativos para D. immitis por la prueba de Knott y ELISA. Además, los perros pertenecientes al grupo Dirofilaria/Leishmania se subagruparon de acuerdo con la forma clínica de CanL como afectados por un «no activo» (es decir, ausencia de signos clínicos y alteraciones de laboratorio compatibles con la forma activa de CanL; Dirofilaria/Leishmania grupo no activo) o «activo» (es decir, presencia de signos clínicos y/o alteraciones analíticas compatibles con CanL; Dirofilaria/Leishmania grupo activo) forma de CanL (24, 25).

Se excluyeron los perros si se sospechaba o se sabía que: (i) estaban afectados por enfermedades o tratados con fármacos capaces de influir en la respuesta inmunitaria y en los marcadores inflamatorios (p. ej., enfermedades neoplásicas, autoinmunes y cardíacas, diabetes mellitus e insípida, hipo e hiperadrenocorticismo o hipotiroidismo, fármacos antiinflamatorios y/o inmunosupresores); (ii) afectados por enfermedades capaces de influir en la VSG de acuerdo con la evidencia actual (es decir, artritis reumatoide canina, osteoartritis y babesiosis) (16-19); iii) afectados por otros patógenos transmitidos por vectores, como A. phagocytophilum y E. canis, o infectados por otros nematodos filariales, a saber, Dirofilaria repens y Acanthocheilonema reconditum. Se excluyeron del estudio todos los animales agresivos, debilitados o gravemente enfermos, así como las hembras preñadas.

2.2 Procedimientos

Para cada animal incluido, los datos de señalización (es decir, edad, sexo y raza), la historia clínica y, si están disponibles, los análisis de laboratorio previos se han registrado en archivos individuales. Se realizó un examen físico completo que incluyó la puntuación de la condición corporal (BCS) y la puntuación de la condición muscular (MSC) basada en una escala de 9 y 4 puntos, respectivamente (26, 27). En la historia clínica del paciente se notificaron signos clínicos compatibles con HWD según las principales guías (28-30). Los perros infectados con gusano del corazón se consideraron sintomáticos si se observaba la presencia de uno o más signos clínicos relacionados con la HWD (es decir, disnea, tos, intolerancia al ejercicio, debilidad, pérdida de peso y síncope), así como signos relacionados con insuficiencia cardíaca congestiva del lado derecho (es decir, ascitis, distensión venosa yugular y hepatomegalia) (28-30). Además, se asignó una puntuación clínica dedicada a CanL siguiendo una escala de evaluación previamente validada que oscilaba entre 0 (es decir, ausencia de signos clínicos) y 19 (31).

Se recogieron muestras de sangre de las venas cefálicas o yugulares y se colocaron en un tubo de EDTA K3 (2 mL) para someterse a una evaluación de VSG y hemograma completo (CBC), mientras que una alícuota de sangre (5 mL) se colocó en tubos lisos para obtener suero después de la centrifugación (15 min a 1.500 × g) y realizar un panel bioquímico que incluyera APP (es decir, PCR y ferritina sérica) y electroforesis de la zona capilar. Además, las muestras de suero se analizaron para detectar anticuerpos anti-A. phagocytophilum y anti-E. canis mediante IFAT y se excluyeron en caso de positividad.

2.3 Análisis de laboratorio

La prueba de Knott modificada utilizada para detectar mfs circulantes en muestras de sangre total se realizó de acuerdo con Genchi et al. (32). En el caso de la positividad, tras la identificación de mfs basada en claves morfológicas (33), se utilizó una PCR cuantitativa dúplex en tiempo real (qPCR) para diferenciar las especies de Dirofilaria (34). En caso de resultados negativos con la prueba de Knott modificada, las muestras de suero se analizaron para detectar la presencia de antígenos específicos de D. immitis mediante el uso de un ELISA en microplaca (Filarcheck, Agrolabo, Scarmagno, Italia).

El IFAT para anticuerpos contra L. infantum se realizó de acuerdo con Iatta et al. (35). Las muestras se consideraron positivas cuando produjeron una clara fluorescencia citoplasmática y de membrana de promastigotes a partir de una dilución de corte de 1:80.

Para evaluar la VSG de los perros, se utilizó un dispositivo de punto de atención (MINIPET, DIESSE, Diagnostica Senese S.p.A., Siena, Italia) según Militello et al. (36). El intervalo de referencia de la VSG se estableció en 1-8 mm/h en 14 min (37).

Los resultados del hemograma (Siemens, ADVIA 2120, Erlangen, Alemania), el análisis bioquímico sérico (Beckman Coulter, Clinical Chemistry Analyzer AU680, Indianápolis, Estados Unidos) y la electroforesis de proteínas séricas (SEBIA Italia S.r.l., Capillarys 2 Flex Piercing, Florencia, Italia) se obtuvieron por los mismos métodos en todas las muestras analizadas. También se realizó un frotis microscópico de sangre para todas las muestras.

2.4 Análisis estadístico

La normalidad de la distribución de los resultados se evaluó mediante la prueba de Kolmogorov-Smirnov. Se utilizó estadística descriptiva, presentando los resultados como media y desviación estándar (M ± DE) o mediana y rango intercuartílico para datos distribuidos normal o no normalmente, respectivamente. Las variables categóricas se expresaron como frecuencias y porcentajes (%). Para analizar las asociaciones entre grupos independientes (es decir, grupo de Dirofilaria, grupo de Dirofilaria/Leishmania, grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania, grupo activo de Dirofilaria/Leishmania y grupo sano), se utilizó la prueba de Wilcoxon Rank Mann-Whitney para las variables continuas y la prueba exacta de Fisher para las variables categóricas. Se empleó la prueba de rangos de igualdad de Kruskal-Wallis para comparaciones que involucraban a más de dos grupos independientes, y la prueba de Dunn facilitó múltiples comparaciones por pares. El coeficiente de correlación de rangos de Spearman evaluó la fuerza y la dirección de las asociaciones entre las variables examinadas. El coeficiente de correlación (ρ) se clasificó como débil (rs = 0-0,3), moderado (rs = 0,3-0,6), fuerte (rs = 0,6-0,9) o muy fuerte (rs = 0,9-1). Los resultados se presentaron como correlación rho y valor p asociado entre paréntesis. La hipótesis nula de no asociación se probó con un nivel de significancia de 0,05 (dos colas). Todos los análisis estadísticos se realizaron con StataCorp. 2023. Stata Statistical Software: Versión 18. College Station, TX: StataCorp LLC.

3 Resultados

Un total de 98 perros de refugio fueron evaluados para su inscripción. Se excluyeron 29 perros que eran negativos para el gusano del corazón y no clínicamente sanos (n = 27), o positivos para anticuerpos anti-Anaplasma (n = 2). Sesenta y nueve [n = 36 machos y n = 33 hembras; 7,0 (1,3-9,0) años] de 98 perros cumplieron con los criterios de inclusión y, en consecuencia, se inscribieron en el estudio, incluidos 22 animales en el grupo de control, 18 en el grupo de Dirofilaria y 29 en el grupo de Dirofilaria/Leishmania. Del último grupo, 21 de los 29 perros estaban afectados por una forma no activa de CanL (es decir, el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania), mientras que los 8 restantes fueron diagnosticados con una forma activa de CanL (es decir, el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania).

Se comparó estadísticamente el nivel de velocidad de sedimentación globular y la proporción de animales con valores de VSG superiores a 8 mm/h en los grupos Dirofilaria, Dirofilaria/Leishmania y control, que se presentan en la Tabla 1. La misma comparación incluyendo las subclases del grupo Dirofilaria/Leishmania se detalla en la Tabla 2 y en la Figura 1.

Los grupos Dirofilaria y Dirofilaria/Leishmania presentaron un nivel de VSG significativamente mayor (p = 0,0002 y p < 0,0001, respectivamente) en comparación con los perros sanos (Tabla 1). El grupo de Dirofilaria/Leishmania no mostró una diferencia significativa en el valor mediano de la VSG que el grupo de Dirofilaria (Tabla 1). Sin embargo, cuando se consideraron las subclases de CanL, los perros infectados con el gusano del corazón afectados por una forma activa de CanL (es decir, el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania) tenían un nivel de VSG significativamente más alto en comparación con todos los demás grupos examinados (Tabla 2). De manera diferente, los perros infectados por el gusano del corazón afectados por una forma no activa de CanL (es decir, Dirofilaria/Leishmaniun grupo no activo) revelaron una VSG similar al grupo Dirofilaria, pero significativamente mayor y menor en comparación con el grupo control y el grupo activo Dirofilaria/Leishmania, respectivamente (Tabla 2).

El porcentaje de animales con un nivel de VSG >8 mm/h fue significativamente mayor en los grupos de Dirofilaria y Dirofilaria/Leishmania, incluidas las subclases CanL, que en los perros sanos (Tabla 1), mientras que no se han encontrado otras diferencias entre los grupos (Tabla 1).

Las correlaciones entre la VSG y los parámetros de laboratorio, incluidos los marcadores inflamatorios, se muestran en la Tabla 3. Se ha encontrado una correlación positiva significativa de moderada a fuerte entre la VSG y la PCR en todos los grupos, excepto en el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania. Además, en el grupo Dirofilaria/Leishmania se detectó una correlación positiva moderada entre la VSG y las globulinas (p = 0,008) y el porcentaje de globulinas beta (p = 0,04), así como una correlación negativa moderada entre la VSG y el TCH (p = 0,03), la albúmina (p = 0,04), el porcentaje de albúmina (p = 0,01) y el cociente albúmina/globulinas (p = 0,01) (Tabla 3). En el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania se encontró una fuerte correlación positiva entre la VSG y el porcentaje de gammaglobulinas (p = 0,02), así como una fuerte correlación negativa entre la VSG y la albúmina (p = 0,01), el porcentaje de albúmina (p = 0,01) y la relación albúmina/globulinas (p = 0,04) (Tabla 3). En el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania no se encontraron correlaciones entre la VSG y los parámetros de laboratorio considerados (Tabla 3).

Los valores de los principales marcadores inflamatorios evaluados (PCR, HPT, ferritina, albúmina y VSG) en el grupo de Dirofilaria y en el grupo de Dirofilaria/Leishmania, incluidas las dos subclases, se compararon estadísticamente y se informaron en la Tabla 4. Entre los APP positivos, el nivel de PCR se incrementó significativamente en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania, donde también el número de perros con un valor aumentado fue estadísticamente mayor en comparación con los otros dos grupos (Tabla 4). En el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania, el número de animales con aumento de ferritina también fue significativamente mayor que en el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania (Tabla 4). No se encontraron diferencias estadísticamente significativas entre los grupos para la haptoglobina (Tabla 4). La albúmina disminuyó significativamente en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania, en el que el 87,5% de los animales presentaron un valor significativamente reducido (Tabla 4).

Desde el punto de vista clínico, los perros presentaron un buen estado de salud con valores medios de BCS y SQM de 2,7 y 1,3, respectivamente. Además, los perros inscritos se consideraron asintomáticos para lo que concierne a la HWD, mientras que los animales del grupo Dirofilaria/Leishmania mostraron una puntuación clínica media de CanL de 1,0 (1,0 en el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania y 1,2 en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania).

4 Discusión

En el presente estudio, se ha evaluado el nivel de VSG en perros infectados de forma natural por D. immitis y se ha comparado con los valores obtenidos de un grupo de animales sanos y una población de perros infectados por el gusano del corazón y seropositivos a L. infantum subclasificados según la forma clínica de CanL. Además, también se estudiaron las posibles correlaciones entre la VSG y otros marcadores inflamatorios habitualmente implicados en la práctica clínica.

En el grupo de Dirofilaria, el valor medio de la VSG (es decir, 12,5 mm/h aprox.) fue significativamente mayor en comparación con el grupo sano (es decir, 7,5 mm/h aprox.), lo que confirma la existencia de una TAE en perros naturalmente infectados por el gusano del corazón que se sabe que se caracteriza por un aumento de la APP circulante en sangre, como la PCR. De hecho, en este grupo de perros infectados por el gusano del corazón, se encontró una correlación positiva entre la VSG y la PCR. Sin embargo, mientras que la PCR se incrementó en el 38,9% de los perros del grupo Dirofilaria, el nivel de VSG fue mayor en casi el 89% de los casos.

En comparación con el grupo de Dirofilaria/Leishmania (VSG = 13 mm/h aprox.), los perros infectados con dirofilariasis presentaron un valor de VSG ligeramente inferior y no estadísticamente diferente. Sin embargo, esta comparación arroja resultados marcadamente diferentes cuando se consideran los subgrupos basados en la forma clínica de CanL dentro del grupo Dirofilaria/Leishmania. De hecho, mientras que los perros en el grupo de Dirofilaria exhibieron un valor de VSG que no fue estadísticamente diferente del de los perros infectados con gusano del corazón afectados por una forma no activa de CanL (es decir, 11 mm/h aprox.), ambos grupos de animales mostraron niveles significativamente más bajos de VSG en comparación con los perros infectados con gusano del corazón afectados por una forma activa de CanL (es decir, 46 mm/h aprox.). Probablemente, estos resultados reflejan la condición clínica de los animales inscritos en este estudio. Teniendo en cuenta que los perros infectados con gusano del corazón eran asintomáticos para lo que concierne a la HWD, ya se ha informado que el aumento de APP como la PCR es más notable según la gravedad de la enfermedad, aunque la respuesta inflamatoria es significativa desde las primeras etapas de la infección, probablemente debido al endosimbionte Wolbachia spp. y al daño vascular (7, 11 y 13). Del mismo modo, los perros incluidos en el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania fueron asintomáticos para HWD y mostraron una puntuación clínica baja de CanL.

Los perros infectados por el gusano del corazón afectados por una forma activa de CanL mostraron el valor medio más alto de VSG (es decir, 46 mm/h aprox.) entre los grupos considerados en el presente estudio. Este hallazgo no es sorprendente dado que la evidencia reciente demostró que los perros con una forma activa CanL tenían un nivel más alto de VSG en comparación con los perros expuestos y sanos a L. infantum (21). Además, la mayoría de estos perros en forma activa (92%) presentaron un aumento de la VSG (21), como también se informó en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania (100%). Si bien la comparación directa de los valores de VSG entre estos dos estudios está excluida por las distintas estadísticas descriptivas empleadas para la presentación de los datos (media vs. mediana), cabe destacar en la presente investigación que el valor medio de la VSG es notablemente elevado. Entonces, con base en la condición clínica y el tipo de alteraciones de laboratorio detectadas en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania, es razonable suponer que el efecto multisistémico de L. infantum en su forma activa puede haber tenido el mayor impacto en la APR.

En el grupo de Dirofilaria/Leishmania, la correlación entre el nivel de VSG y el resto de parámetros, incluidos los marcadores de inflamación, difiere mucho cuando se considera el grupo en su conjunto o los subgrupos en función de la forma clínica de la CanL. En el grupo no activo de Dirofilaria/Leishmania, la VSG no parece correlacionarse con ninguno de los parámetros. Esto es similar al grupo de Dirofilaria, donde la única correlación identificada fue con la PCR. Este hallazgo puede indicar la participación de factores adicionales que contribuyen al aumento observado de la VSG dentro de este grupo.

En el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania se ha encontrado una correlación fuerte y positiva entre la VSG y la PCR, que es la principal APP positiva en perros, así como las gammaglobulinas. Se sabe que se produce un aumento de las concentraciones de estas proteínas séricas tanto en la HL como en la HWD, pudiendo influir en la VSG acelerando las aglutinaciones de los eritrocitos como se sabe de la medicina humana (38, 39). Además, se descubrió una correlación fuerte y negativa en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania entre la VSG y la albúmina, una APP negativa cuya reducción se espera tanto durante la HL como en la HWD (7, 31, 40, 41). Se cree que la albúmina rompe los rojiblancos y ralentiza la agregación de glóbulos rojos, lo que resulta en una VSG más baja y potencialmente explica la correlación entre la hipoalbuminemia clínica y la VSG elevada (42). Sin embargo, este resultado difiere del obtenido en perros negativos para el gusano del corazón afectados por una forma activa de CanL, donde no se encontró tal correlación (21).

En el contexto de la APP positiva, se debe hacer mención de la haptoglobina y la ferritina. Aunque no se encontraron diferencias estadísticamente significativas, cabe destacar que en todos los grupos aquí considerados, el número de animales con haptoglobina reducida fue mayor que el de aquellos con un valor aumentado (Tabla 4), a pesar de ser un APP positivo. Este resultado paradójico es consistente con informes previos en perros infectados con gusano del corazón (6, 10, 41), pero se necesita más investigación.

La ferritina solo se ha evaluado una vez en perros con HWD, mostrando un aumento moderado (41). Por el contrario, en perros con leishmaniosis se conoce un aumento de la ferritina (43, 44). En la población canina aquí considerada, no se encontraron diferencias estadísticamente significativas, excepto en el número de animales con el parámetro aumentado, que fue significativamente mayor en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania. Teniendo en cuenta que el mecanismo preciso que subyace a los aumentos de la ferritina sérica no se comprende bien (45, 46) y que los datos limitados disponibles para enfermedades específicas como la HWD, el papel de la ferritina como APP en perros infectados por el gusano del corazón, así como en animales coinfectados con L. infantum, merece una investigación adicional.

Este estudio tiene algunos límites, como el pequeño número de perros incluidos en el grupo activo de Dirofilaria/Leishmania. Sin embargo, la infección asintomática es el resultado más común de la exposición a los parásitos de Leishmania (47-49). Además, la población inscrita en este estudio no presentaba formas clínicas manifiestas de HWD. Por lo tanto, es razonable suponer que el aumento de los niveles de VSG puede ser mayor en perros infectados por el gusano del corazón con formas clínicas más graves (p. ej., hipertensión pulmonar y síndrome caval), como se ha demostrado para la PCR, que aumenta según la gravedad de la enfermedad (11-13). Por último, la medición de la VSG en perros tiene actualmente algunas limitaciones. Faltan factores de corrección basados en los valores de hematocrito, y no hay información sobre la posible influencia de factores clave como la edad, el sexo y el estado reproductivo de los perros en el nivel de VSG. Se requiere investigación adicional para dilucidar estos aspectos que se sabe que afectan a la VSG, como se ha informado en la medicina humana (50).

En conclusión, este estudio presenta la primera evaluación de la VSG medida por un dispositivo de punto de atención en perros infectados naturalmente por D. immitis y en una población de animales infectados por el gusano del corazón y seropositivos a L. infantum. Se confirmó que la VSG es un marcador de inflamación, así como un índice de enfermedad útil, y se incrementó notablemente en perros infectados con gusano del corazón afectados por una forma activa de CanL, como se informó anteriormente (21). Se necesitarán más estudios para evaluar el uso de la VSG en entornos clínicos, como su potencial como herramienta de seguimiento para la monitorización posterior al tratamiento.

Declaración de disponibilidad de datos

Los datos brutos que respaldan las conclusiones de este artículo serán puestos a disposición por los autores, sin reservas indebidas.

Declaración ética

Los estudios en animales fueron aprobados por el Comité de Ética del Departamento de Medicina Veterinaria de la Universidad de Bari (Prot. Uniba 24-2022). Los estudios se llevaron a cabo de acuerdo con la legislación local y los requisitos institucionales. Se obtuvo el consentimiento informado por escrito de los propietarios para la participación de sus animales en este estudio.

Contribuciones de los autores

MAC: Conceptualización, Curación de datos, Análisis formal, Obtención de fondos, Administración de proyectos, Visualización, Redacción – borrador original. OG: Investigación, Curación de datos, Redacción – revisión y edición. AU: Investigación, Escritura – Revisión y Edición. FG: Escritura – revisión y edición. VT: Investigación, Redacción – revisión y edición. RD: Análisis formal, Redacción – revisión y edición. MS: Escritura – revisión y edición. AZ: Conceptualización, Obtención de Fondos, Administración de Proyectos, Supervisión, Redacción, Revisión y Edición.

Financiación

El/los autor/es declaran/n que se recibió apoyo financiero para la investigación, autoría y/o publicación de este artículo. Los autores declaran que este estudio recibió financiación de DIESSE Diagnostica Senese S.p.A. El financiador no participó en el diseño del estudio, la recopilación, el análisis, la interpretación de los datos, la redacción de este artículo ni la decisión de enviarlo para su publicación.

Conflicto de intereses

Los autores declaran que la investigación se llevó a cabo en ausencia de relaciones comerciales o financieras que pudieran interpretarse como un posible conflicto de intereses.

Nota del editor

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Referencias